大亚湾紫红笛鲷野生群体遗传多样性的RAPD分析.pdfVIP

论文汇编 第五届中南地区实验动物科技交流会 大亚湾紫红笛鲷野生群体遗传多样性的RAPD分析‘ 牛文涛’。蔡泽平1 i1．中国科学院南海海洋研究所，广东广州510301；2．中国科学院研究生院，北京100049) 【摘要】紫红笛鲷野生群体样品取自广东大亚湾海区，取背部肌肉，提取DNA， 用RAPD技术检测遗传多样性。40个随机引物当中，有11个引物得到了书带清晰、 位点较多且重复性好的电泳图谱。11个引物共得到76个条带，其中48个多态位点， 多态位点比例为63．16％。平均遗传距离为0．2144。遗传多样性指数为0．1876。结 果显示，大亚湾海区的紫红笛鲷具有较丰富的遗传多样性，工程建设以及人为捕捞等 对紫红笛鲷的遗传结构影响不明显。在该海区进行紫红笛鲷的养殖，可以选择野生紫 红笛鲷作为亲本培育种苗，但应该注意合理的保护，防止遗传多样性的丧失。‘ 【关键词】大亚湾；紫红笛鲷；遗传多样，i$-；随机扩增多态·陆DNA 【中图分类号】Q959．483【文献标识码】A 紫红笛鲷(Lutjanus 平洋中部和西部，我国主要分布在南海诸岛、海南、广东和台湾等省近岸珊瑚礁、岩礁及沙泥底质浅 海水域。该鱼具有生长决，养殖周期短，肉嫩味美，耐高温，广盐性，抗病力强等优点，是水产养殖的 重要鱼种“J。近年来，由于该鱼市场价格高，在东南亚以及澳大利亚已成为非常受欢迎的养殖品种， 但由于种苗主要来源于野生鱼苗，受数量、季节性以及不可预知因素影响，其养殖受到一定限制。而 在我国南方，养殖的紫红笛鲷种苗大部分来自台湾省的人工繁殖场，近亲繁殖现象严重，品质已经出 现了退化。有关紫红笛鲷繁殖和营养、饲料等方面研究国内外已有一些报道”。J，而对其遗传多样 性方面的研究相关报道较少。 大亚湾是广东省沿岸最大的海湾之一，该海域鱼类资源丰富，生境类型众多。是一优良的增养殖 高质量鱼类的水域，但大规模海洋工程建设、渔业捕捞和养殖水域开发等对大亚湾海洋环境及生物 资源会产生一定程度的影响”1，也可能影响鱼类的遗传基础。本文旨在利用随机扩增多态性DNA 技术(RAPD)对我国大亚湾海区紫红笛鲷自然群体在分子水平上的遗传多样性进行研究，为评估紫 红笛鲷种质资源和建立其遗传多样性数据库提供基础资料．同时也为人工养殖及品种培育提供相关 的遗传背景资料。 1材料与方法 1．1材料来源 于2003年12月23日在广东大亚湾海区。共捕获8尾野生紫红笛鲷幼鱼。活体带回实验室，取 mall．coffno 153 第五届中南地区实验动物科技交流套 论文汇编 鱼背部肌肉作为实验材料，一80℃超低温冰箱保存。 1．2基因组DNA的提取 用上海华舜生物工程有限公司出品的小量组织／细胞基因组DNA抽提试剂盒提取每个个体的 总DNA。取20rag左右的肌肉，用灭菌双蒸水洗涤两次，按其提供的程序提取DNA。 1．3引物筛选1 应条件下，对引物进行筛选。选择条带清晰、扩增结果稳定、具有多态性的引物进行分析。 1．4 RAPD反应条件及结果检查 反应PCR仪为Gene 2700。反应总体积为251^L，其中10×raq缓冲液2． Amp?的PCRSystem 5止，Ex 2min，最后经 件为94℃预变性5min后再进行45个循环，每一循环包括94℃lmin、36℃lmin、72。C 72*C延伸10min后4℃保存。扩增产物经1．0％琼脂糖凝胶电泳分离，溴化乙锭染色．用凝胶图像及 分析系统(法国VL公司产品)拍摄记录分析结果。 I．5数据处理 (a)依据RAPD产物的电泳带型进行分析，记录清晰且重复性好的条带，将相同迁移距离的条带 看作1个位点，统计位点总数、多态位点数，计算多态位点比例P(P为群体的多态位点数除以位点总 数乘100％)。 (b)用RAPDistance 1．04软件分析