日本文部科学基因重组试验指引-生物产业自动化教学及研究中心.docVIP

日本文部科學省 基因重組實驗指南 第七章 (產製轉殖動物(植物)的實驗 (使用轉殖動物(植物)的實驗 (對動物(植物)接種重組體的實驗 (2)使用植物的實驗 密閉型的實驗室、植物培養裝置及密閉型溫室 ( 使用農桿菌(agrobacteerium)的感染實驗或用電穿孔轉型法(electroporation)，基因槍(particle gun)的方法做出的轉殖植物，可由原生質體(protoplast)，癒合組織(callus)等的組織狀態誘導出植物個體。此時的植物體甚小，可在閉鎖式的試驗管內或培養瓶 (flask)內培養。如設法誘導出根及地上部時，則進入栽培轉殖植物的階段，此時需依使用植物的種類、大小，繼代之有無等選用封閉式生長箱、人工氣候裝置(phytotron)等專用的密閉式植物培養裝置)(以下統稱為「植物培養裝置」)，甚至需用到密閉式溫室，在實驗室內放置這些裝置時，須清楚標示實驗區域。 ( 轉殖植物的栽培管理上最重要者是防止花粉、孢子及種子(以下統稱「花粉等」)等飛散到外界之對策。具體上，實驗室植物培養裝置及密閉式溫室等之排氣，在轉殖植物做出時，採用物理方法過濾、補捉花粉等防止流出外界。但在開花前採用掛袋方法等裝置防止花粉外流的方法則不在此限(採用掛袋式並不表示在一般的實驗室內可栽培，而須有P1等級的封閉防止為前提)。 ( 與(同樣的觀點，可傳播花粉等之昆蟲也須加以防止。 ( 實驗室內最好不要有排水口，如有排水口時須設置過濾裝備防止轉殖植物體自排水口流出，同時排水不要直接流入一般的排水溝內，而須有儲留之處理方法。排水須先經高壓滅菌後再排除。在鉢植狀態時，栽培管理上須在鉢底放置盛水底盤等，在澆水時須考慮不溢出水分。 ( 轉殖植物所使用的廢棄物及土壤等的處理，須採用已確認的有效方法，在滅菌時，滅菌釜(autoclave)、盆器(pot)等消毒的藥液槽須設置在實驗區域內。 ( 在轉殖植物的實驗室與栽培管理的實驗室內如實驗用的植物體、土壤、盆器 (pot)等裝置及設備有一段距離時，在移動過程中必須以密閉方式進行。自實驗室內搬運轉殖植物時，為了防止轉殖植物的漏出，須放置在不易破損的容器內，並在易於辨識處標示清楚，同時在容器底部內放置擦手紙或衛生紙(toilet paper)，防止水及土壤外溢。 ( 進行栽培管理的實驗室，須在明顯處標示「轉殖植物實驗中」之告示牌。 ( 為防止實驗人員進出實驗室時，會將黏附於衣物的種子等帶出實驗室外，在實驗室內須放置專用的實驗衣及鞋子等，並不得將這些衣物帶出實驗室外，同時須洗手後離開。 ( 實驗區域內，閒雜人等應禁止入內。 ( 實驗所使用之轉殖植物所得的後代，如要培養時，須與第一代用相同的方式培養，但相異轉殖植物交配後所得的後代，有可能出現親本所沒有的新性狀，此時須用較為精密的栽培管理，並依用途採用不同的安全評估方法。 (( 如同時與微生物或動物進行實驗時，須依其特性，將實驗植物放置於適當的植物培養裝置內。 (( 轉入轉殖植物的DNA或接種的轉殖體需做適當的紀錄及保存。 對其他生物不具自主性的DNA導入而做出的轉殖植物的實驗，上述7-12項不適用(請參閱P36※)。 又，農林水產省等國內其他行政機關在室外規劃栽培業經許可的轉殖植物，須依該機構的規定遵守其栽培注意事項進行實驗即可，不必遵守本規定。如在規劃以外的地區栽培，或同種類的轉殖體而使用未許可的其他系統做實驗時，則不被允許。 其他，依栽培設施的不同，須留意下列事項： (密閉式生長箱，人工氣候室等室內用植物培養裝置，在清潔室內放置培養瓶時，應將含有重組體及未含重組體之培養瓶，分別放置於不同的棚架上。 (密閉型溫室 天窗及側窗等窗口全部呈密閉狀態，因此須有空調設備控制溫度，氣窗須有防止昆蟲等進入的設備，非內部循環式之溫室設施時則不需要有。 (植床須為水泥台 (設置前室，並在該處放置滅菌釜 (不放在室內的人工氣候室(phytotron)，可適用密閉型溫室的方法。 圖：Growth chamber(植物生長箱)之例 非密閉型溫室: 執行實驗時，依別紙2所示，進行安全性評估，並依其規定措施執行。操作實驗之區域，須就實驗目的、轉殖植物之特性、實驗規模、預定進行實驗之場所等進行綜合勘察，來決定使用何種必要之硬體防護措施(如溫室、網室等)。下列所舉之考量項目，大多是由密閉型實驗規劃中，產製重組體的階段認為必要，亦可運用於非密閉型溫室設施者，如：是否產生有害物質、轉殖導入植物體的基因之性質、是否具指標意義的重組體等議題，個別進行試驗。對這些項目的意見，試驗結果及討論等，請儘可能列入實驗計畫書內(對過去尚無結果的項目，也請記入)。 ＜植物實驗安全性評估時的考慮事項＞ I.轉殖植物之特性 1. 轉殖植物之由來 (1)轉殖植物的製作方法 (2)使用之植物或該植物所