秋海棠染色体核型分析.ppt

Meiotic aberrations during 2n pollen formation in Begonia海棠形成二倍体花粉过程中减数分裂的像差(畸变) 姓 名： 季 晓 钒 学 号： 3120051 谢谢！ * 摘要： 在自然界中未减数配子对于多倍体繁殖是一种推动力，是倍性育种的一种重要工具。2n花粉粒最终的杂合度取决于2n花粉形成后细胞学的机制。在这项研究中，利用荧光染色体染色花粉母细胞来分析七种海棠基因型在小孢子发生过程中染色体的配对和分离。在这七种基因型中，五种基因型产生2n花粉（B.‘Bubbles’，B.’Florence Rita’B. ‘Orococo’, B. ‘Tamo’ and B276）和两种基因型只产生正常的n花粉(B. fischeri and B243) 所有产生2N花粉的都显示了一种等同与第一次分裂核再组（FDR）的机制，在减数分裂中特别是第二阶段FDR过程中染色体没有分离。 这种FDR的作用结果：1.在B‘Tamo’类型中有不规则的染色体配对 2.在B.’Florence Rita和B276中染色体相粘性与大量染色体桥有关 3.在B.‘Bubbles’中存在不规则染色体配对的结合和染色体的粘性。 在b .Orococo“中细胞核复原的精确的作用机制不可能被确定的。其他作用机制，如早期不对称的胞质分裂，减数第二次分裂的漏缺，并联或三级纺锤体的形成，都是相当少见的。在所有基因型中都观察到未配对的染色体（单价染色体），而在减数分裂I 或 II后期结束前单价染色体已经移动到两极。只有B. ‘Tamo’形成大量的微核。因此，这个基因型形成了大量的畸形花粉。很显然，在秋海棠减数分裂中染色体行为非常有活力，这对于染色体进化和生物种属多样性上具有重要影响。 材料和方法： 植物材料: 根据先前发表的结果，选择了五种产生2n花粉的海棠基因型： B. ‘Orococo’ (2n=40+1 or 2 fragments),B. ‘Tamo’ (2n=23+0 to 2 fragments), B. ‘Bubbles’(2n=78), B. ‘Florence Rita’ (2n=54) and B276 (2n=50).作为控制，两种基因型产生的只有正常的花粉被使用： B. fischeri (2n=92) and B243 (2n=22).在温室的标准条件下种植海棠。（(20±2 ℃,）自然光和作用阶段16h/天（光合作用光子通量密度30 毫molm-2 s-1)).这些基因型小孢子发生特征和花粉的特征如表格1和2（(adapted from Dewitte et al., 2009). 减数分裂的研究: 从新的花芽中取出未成熟的花药，随后立即切除其中一个花药迅速的滴一滴盐水柠檬酸钠缓冲液（0.3M NaCl, 0.03M sodium citrate; pH 7) containing 1 mM 40,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)），盖上盖玻片并准备使用光学或者荧光显微镜去观察。当在减数分裂过程中的含有花粉母细胞的花粉，同一花的其他花药一个个用同样的方法进行评估减数分裂不同的阶段（减数第一阶段的前期到减数第二阶段的末期）。每个阶段至少100个细胞被记录。 减数第一阶段的中期为了观察染色体配对，花药被固定在乙醇/乙酸（3:1）。在4℃隔夜培养，在45％的乙酸中切除花药且移除花药碎片。在盖上盖玻片后，使用液态氮冻结载玻片。使用锋利的刀片盖上盖玻片，准备用98％的乙醇进行清洗，然后进行至少一个小时风干。对染色和切片区用盐水柠檬酸钠缓冲液清洗（SSC）。加一滴100微升DAPI复染色(1 mM DAPI in SSC)然后盖上25*25的盖玻片。培养5分钟后移开盖玻片，在SSC缓冲液中清洗切片。一滴Vectashield (Vector Laboratories, Burlingame,CA, USA)。加上封固剂，盖上25*50盖玻片且在显微镜下观察（在4℃中储存切片）。评定染色体配对至少基于50个花粉母细胞。 结论： ⑴在减数分裂细胞核还原的形成过程: 所有基因型中观察到同步类型的减数分裂：四个细胞核形成后才开始进行胞质分裂。B243 and B. Fischeri类在控制下同一花的单个花药，花粉母细胞通过减数分裂进行发展（图1）。 相反地，B.‘Orococo‘类型的49%的花粉母细胞不能同其他花粉母细胞一起进行到减数分裂第一次的后期而形成两个同等细胞核。相反地，形成单一的细胞核重组（图a-d）。同样的现象在B. ‘Tamo