色谱法原理与应用- 3.pptVIP

* 相对校正因子 摩尔校正因子 被测组分的质量 标准物质量 分子量 * 定量方法 归一化法 内标法 —— 含内标标准曲线法 外标法 —— 含单点校正 * 校正归一化法 推导： * 应用范围：当试样中各组分都能流出色谱柱，且在检测器上均有响应，各组分峰没有重叠时，可用此法。 优点：简便、准确，当操作条件如进样量等变化时，对定量结果影响很小，该法适合于常量物质的定量。 缺点：对该法的苛刻要求限制了它的使用。 * 内标法 推导 将一定量的纯物质作为内标物，加入到准确称量的试样中。 * 适用范围：当只需测定试样中某几个组分，且试样中所有组分不能全部出峰时可用。 优点：受操作条件的影响较小，定量结果较准确，使用上不象归一化法那样受到限制，此法适合于微量物质的分析。 缺点：每次分析必须准确称量被测物和内标物，不适合于快速分析。 * 外标法（标准曲线法） 用于常规分析 优点：操作简单，计算方便。 缺点：结果的准确度取决于进样量的重现性和操作条件的稳定性。该法必须定量进样。 * 载气及流速 （1）根据所用的检测器类型 如：火焰离子化检测器需用氮 气和氢气。 （2）适当提高载气流量可以缩短 时间。 进样量的控制 与柱容量，固定液配比及仪器的线性响 应范围有关。柱径越粗，固定液配比越 高，允许进样量越大。最大允许进样量 在半峰不变的情况下，峰高与进样量呈 线性关系的范围内。 温度控制 受试样沸点的限制。 * * 色谱柱的选择 （一）内装固定相的填充柱； （二）内壁涂固定液的毛细管柱 固体吸附剂：适于分离永久性气体和低沸点烃类。 载体：由化学惰性的、多孔的固体微粒构成，要求其热稳定性好，无催化活性，孔径均匀，比表面积大，不易破碎。 固定液：要求沸点高，挥发性小，热稳定性和化学稳定性高，对各组分有适当的溶解能力，选择性好。 * 第3章 高效液相色谱法的建立与应用high performance liquid chromatography * 高效液相色谱仪的分析原理 高效液相色谱仪的结构 色谱柱在高效液相色谱仪中的作用和峰形产生原理 高压泵 进样器 检测器 色谱工作站 色谱柱 高效液相色谱法分类 液固吸附色谱 液液分配色谱 离子交换色谱 凝胶色谱 亲和色谱 * * HPLC有以下特点 高压——压力可达150~300 Kg/cm2。色谱柱每米降压为75 Kg/cm2以上。 高速——流速为0.1~10.0 ml/min。 高效——可达10000塔板每米。在一根柱中同时分离成份可达100种。 高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。 * 1食品分析 应用举例 * * 2.环境分析 * 3.药物分析 * 4. 农药分析 * 评价色谱柱好坏的标准 1）理论塔板数N 2）拖尾因子Tf 3）色谱柱背压 4) 色谱柱批与批之间的重现性 5）pH值的适用范围 6）使用寿命 LOGO LOGO * 色谱法Chromatography * 色谱技术的创始人——茨维特（1872~1919） 他在研究中观察到 石油醚极易溶解离析态的叶绿素和相关色素，但不能直接从植物叶中提取出色素. 乙醇(甚至在其它溶剂中加入少量乙醇)则很容易直接提取出植物叶中的色素。 * 茨维特的实验 * 色谱分离效果图 * 色谱法 气相色谱法 气相色谱仪 有效测定公式 色谱柱效能 定性定量操作 分离操作的条件选择 高效液相色谱法 高效液相色谱仪 高效液相色谱法分类 高效液相色谱应用 毛细管电泳法 * 分离原理: 依据不同物质在流动相中与固定相的相互作用的不同而产生不同的分配率,经过多次分配而达到混合物的分离的目的。 * 3、色谱法的分类 按流动相状态的不同，可分为 气相色谱法 (GC) 液相色谱法 (LC) 超临界流体色谱 (SFC) * 什么是气相色谱法？ 以气体为流动相的色谱法 Gas Chromatogaphy，简称GC 适合分离分析易汽化（在- 190℃-500℃范围内有0.2-10mmHg的蒸气压的）稳定、不易分解、不易反应的样品，特别适合用于同系物、同分异构体的分离。 * GC-14C GC-3 GC-4 GC-7 GC-9 GC-14 GC-17 GC-8A GC-2010 GC-2014 气 相 色