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合欢花多糖提取工艺和其抗氧化活性探究 　　摘要：采用热水浸提法提取合欢花中的多糖，通过单因素试验和正交试验考察了浸提温度、浸提时间、水料质量比、浸提次数对多糖提取率的影响，并且探讨了合欢花多糖对羟基自由基、亚硝酸根离子的清除作用。结果表明，各因素对合欢花多糖提取率的影响由大到小依次为浸提温度、浸提时间、水料质量比；最佳提取工艺条件为浸提温度90 ℃、浸提时间4 h、水料质量比30∶1、提取2次，在此条件下合欢花多糖的提取率为5.72%。合欢花多糖对羟基自由基和亚硝酸根离子有较强的清除能力。 关键词：合欢花；多糖；提取工艺；抗氧化活性 中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）11-2625-04 合欢花（Flos Albiziae）为豆科植物合欢（Albizia julibrissin Durazz.）的干燥花序，具有安神解郁、活血、消痈肿等作用，适用于郁结胸闷、忿怒忧郁、虚烦不安、健忘失眠等症[1，2]。大量的药理和临床研究表明，多糖类化合物是一类免疫调节剂，它能激活免疫细胞，提高机体的免疫功能，而且对正常细胞没有毒副作用，已逐渐发展为一种免疫疗法[3-5]。从植物中，尤其是从中草药中提取的水溶性多糖没有细胞毒性，除了参与生物体的免疫调节功能，还具有降血糖、降血脂、抗炎、抗肿瘤、抗疲劳、抗衰老等功能[6，7]，其药物质量通过化学手段容易控制，已成为当今新药的发展方向之一。本研究采用热水浸提法[8]提取合欢花中多糖，利用正交试验[9]对提取条件进行优化，并探讨了合欢花多糖对羟基自由基（·OH）及亚硝酸根离子（NO2-）的清除作用，为深入了解合欢花的药用和保健功能，促进合欢花资源的开发利用提供科学依据。 1 材料与方法 1.1 材料与仪器 1.1.1 材料和试剂 合欢花购买于新乡市张仲景大药房；主要试剂无水乙醇、苯酚、葡萄糖、维生素C、亚硝酸钠、对氨基苯磺酸、盐酸萘基乙二胺、水杨酸、硫酸亚铁、过氧化氢等为国产分析纯。 1.1.2 主要仪器 752型紫外可见分光光度计（上海菁华科技仪器有限公司）、CH1015超级恒温水槽（上海衡平仪器仪表厂）、SBH-II循环水式真空泵（郑州长城科工贸有限公司）、BS244电子分析天平（德国Sartourus公司），R206D旋转蒸发器（上海申生科技有限公司）。 1.2 方法 2 结果与分析 2.1 单因素试验结果 2.1.1 浸提温度对合欢花多糖提取率的影响 准确称取3.0 g脱脂的合欢花粉末5份，加入60 mL去离子水，分别在60、70、80、90、100 ℃水浴中浸提2 h，所得合欢花多糖提取率结果如图1所示。由图1可知，浸提温度小于90 ℃时，提取率随着温度的升高而升高，浸提温度为90 ℃时多糖提取率最大，之后再升高浸提温度，提取率略有下降，可能是温度太高破坏了多糖的结构，而且使提取成本增加。因此，浸提温度宜选择90 ℃。 2.1.2 水料质量比对合欢花多糖提取率的影响 准确称取3.0 g脱脂的合欢花粉末5份，分别加入30、45、60、75、90 mL去离子水，即水料质量比分别为10∶1、15∶1、20∶1、25∶1、30∶1，在90 ℃水浴中浸提2 h，所得合欢花多糖提取率结果如图2所示。由图2可知，合欢花多糖提取率随水料质量比的增大而升高，水料质量比达到25∶1后再继续增大则其提取率增加速度缓慢，说明合欢花中多糖基本提取完全。考虑到去离子水用量过大会导致浓缩工艺能耗增加，所以选择水料质量比20∶1～30∶1为进一步优化的范围。 2.1.3 浸提时间对合欢花多糖提取率的影响 准确称取3.0 g脱脂的合欢花粉末5份，用75 mL去离子水在90 ℃水浴中分别浸提0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 h，所得合欢花多糖提取率结果如图3所示。由图3可知，多糖提取率随着浸提时间的延长而升高，当浸提时间超过3 h后多糖提取率增加不明显，趋于稳定，说明浸提3 h时原料中的多糖已几乎完全溶出。 2.1.4 浸提次数对合欢花多糖提取率的影响 准确称取3.0 g脱脂的合欢花粉末，用75 mL去离子水在90 ℃水浴中浸提3 h，抽滤，将滤渣再按上述条件浸提2次，每次所得滤液按“1.2.2”测定多糖提取率，结果见图4。由图4可知，经过2次提取，合欢花中多糖基本提取完全，因此，浸提次数选择2次。 2.2 正交试验结果 在单因素试验的基础上，采用去离子水为浸提剂，将浸提次数确定为2次，以浸提温度、浸提时间、水料质量比为因素，多糖提取率为指标进行L9（34）正交试验，结果见表2。由表2可知，3个因素对合欢花多糖提取率影响的主次顺序为浸提温度、浸提时间、水料质量比；各因素的最优组合为