共同沉默DcR3和EGFR基因对结肠癌细胞株SW480体外生长的影响.pdfVIP

24 福建 医科大学学报 2017年 2月 第 51卷第 1期 共同沉默 DcR3和 EGFR基因对结肠癌细胞株 SW480体外生长的影响 杨树钢 ，林建安，陈绍勤，叶建新 摘要 ： 目的 探讨共 同沉默诱骗受体 3(DcR3)和表皮生长 因子(EGFR)基因对结肠癌细胞株 SW480生长增 殖 的影 响和诱导凋亡作用研 究 。 方法 根据 DcR3、EGFR 的 cDNA序列构建 3组针对 DcR3和 EGFR 的 siRNA，分别使用脂质体 Lipofectamine2000转染的方法将各个 siRNA导人结肠癌细胞株 SW480中，48h后通过 实时荧光定量 PCR检测各个 siRNA对肿瘤靶基 因mRNA表达 的影 响，采用 Western—blot技术检测其靶基 因蛋 白 的表达水平 ，筛选 出对人结肠癌 SW480细胞系 中DcR3和 EGFR抑制效果最强的 siRNA，然后单独或联合转染 SW480细胞 ，MTT法检测转染后对结肠癌细胞株 SW480生长增殖活性的影响，流式细胞仪检测对结肠癌细胞株 SW480的诱导凋亡作用 。 结果 共 同沉默 DcR3和 EGFR基 因对 SW480细胞增殖 的抑制作用优于 DcR3或 EGFR单基 因沉默组 (Po．05)。双基 因共沉默组、DcR3单基 因沉默组、EGFR单基 因沉默组转染 48h后转染细 胞的凋亡率分别为 (20．1--+-1．7) ，(16．5±2．2) 及 (15．9±1．3) ，差别具有统计学意义 (P0．05)。 结论 DcR3和 EGFR双基 因共沉默能有效抑制人结肠癌细胞株 8W480的增殖并诱导其凋亡 ，且作用优于 DcR3或 EGFR单基 因沉默 。 关键词 ： 受体 ，肿瘤坏死 因子 ，成员 6b；受体 ，表皮生长 因子 ；结肠肿瘤 ；*基 因；*基 因沉默 ；细胞凋亡 ； 细胞增殖 中图分类号： R394；R394．114；R394．2；R735．35 文献标志码 ： A 文章编号： 1672—4194(2017)01-0024—06 结直肠癌是威胁人类生命和健康 的常见肿瘤之 扰是一种封闭基 因表达 的有效方法 ，通过 siRNA诱 一 。 近年来 ，结肠癌的发病率与死亡率呈 明显上升 导的基 因沉默现象 ，与反义寡核苷酸技术相 比能更 趋势口]。目前 ，肿瘤外科手术治疗 、放射治疗、内科 高效地抑制 目的基 因的表达 ，具有 高度特异性、高 治疗 (化学药物治疗 、生物治疗)和基 因靶 向治疗相 效 、稳定 的特点 。 结合的个体化综合治疗模式是优化结肠癌治疗效果 本研究根据 DcR3、EGFR 的 cDNA 序列分别 所推崇的模式 。分子靶 向治疗成为近年来肿瘤治疗 构建针对 DcR3和 EGFR的siRNA，通过 siRNA共 发展领域 的研究热点 ，越来越受到重视 ，单基因靶 向 沉默人结肠癌细胞株 8W480的 DcR3和 EGFR基 治疗结肠癌已获得一定进展 ，但处于一个平台期 ，因 因与沉默单个基因的作用效应进行 比较，研究共 同 此联合共 同作用于肿瘤细胞中的多个癌基 因是肿瘤 沉默 DcR3和 EGFR 基 因对 人 结 肠 癌 细胞 株 基因治疗 中一个新 的研 究 方 向l2]。诱骗受 体 3 Sw480的增殖活性和凋亡状态的影响 ，初步探讨双 (decoyreceptor3，DeR3)是 由Pitti等发现的可溶 基 因靶点抑制在结肠癌基 因治疗 中的可行性 。 性肿瘤坏死因子受体超家族成员，能够对细胞生长 1 材料与方法 发育和分化进行调节 ，诱导肿瘤细胞的上皮一问质转 化 ，与肿瘤的增殖和迁移侵袭能力关系密切 ，可作为 1．1 材料 细胞株 ：结肠癌细胞株 Sw480(武汉大 肿瘤恶化 的一种重要生物学标志物_3]，临床应用前 学细胞典藏 中心)。主要试 剂 ：转染试剂脂质体 景广阔。表皮生长因子受体 (epidermalgrowthfac— LipofectamineM。2000(美 国 Invitrogen公 司)；