(仪器分析）9.3高效毛细管电泳的理论基础.ppt

第九章高效毛细管电泳分析法 9.3.1 PHCE基本原理 9.3.2 PHCE中的基本基本关系式 9.3.3 影响分离效率的因素 9.3.1 高效毛细管电泳基本原理 双电层与电渗流 1.HPCE中电渗流的大小与方向 HPCE中电渗流的方向 2. HPCE中电渗流的流形 3. HPCE中电渗流的作用 4.HPCE中影响电渗流的因素 (3) 电解质溶液性质的影响 (4) 温度的影响 (5) 添加剂的影响 9.3.2 HPCE中的基本关系式 2.分离效率（塔板数） 3.分离度 9.3.3 影响分离效率的因素—区带展宽 3.电解效应的影响 电解效应的影响规律 4.焦耳热与温度梯度的影响 5.溶质与管壁间的相互作用 6.其他影响因素 请选择内容 第三节高效毛细管电泳理论基础 High performance capillary electrophoresis,HPCE Basic theory of HPCE 电泳是指带电离子在电场中的定向移动，不同离子具有不同的迁移速度。迁移速度与哪些因素有关？ 当带电离子以速度ν 在电场中移动时，受到大小相等、方向相反的电场推动力和平动摩擦阻力的作用。 电场力：FE = QE 阻 力：F = f?e 故： QE = f ? e Q —离子所带的有效电荷； E —电场强度； ? e—离子在电场中的迁移速度； f —摩擦系数。 所以，带电离子在溶液中的迁移速度： 物质离子在电场中差速迁移是电泳分离的基础。 淌度μ ：单位电场强度下的平均电泳速度。 被分离组分的保留时间 t 为： μe ：电泳迁移率（电泳淌度,单位：cm2·V-1 ·s -1 ），E：电场强度，V：电压；L：毛细管长度（有效长度为 l ）。 Q为离子所带的静电荷,f为stokes阻力系数 对于球形离子： f = 6πηr Rs —离子的表观液态动力学半径；η —介质的粘度； 从上式可见，当毛细管长度一定时，带电离子的迁移速度与溶质离子的电荷、施加的电压、缓冲液黏度及带电离子的大小有关。电渗流是驱动离子运动的第二种作用力。 石英毛细管柱，内充液pH3时，表面电离成-SiO-,管内壁带负电荷，形成双电层。 在高电场的作用下，带正电荷的溶液表面及扩散层向阴极移动，由于这些阳离子实际上是溶剂化的，故将引起柱中的溶液整体向负极移动，形成电渗流，速度ν电渗流。 电渗流的大小用电渗流速度?eo表示，取决于电渗流迁移速度μeo 和电场强度E。即： ?eo = μeo E 电渗流迁移速度μeo取决于电泳介质及双电层的Zeta电位?，即： l —毛细管有效长度； teo—电渗流标记物（中性物质）的迁移时间。 ?为溶剂的介电常数；?为双电层的Zeta电位。 实际电泳分析，可在实验测定相应参数后，按下式计算 电渗流的方向取决于毛细管内表面电荷的性质： 内表面带负电荷，溶液带正电荷，电渗流流向阴极； 石英毛细管：内表面带负电荷，电渗流流向阴极。 改变电渗流方向的方法： （1）毛细管改性 表面键合阳离子基团。 （2）加电渗流反转剂 内充液中加入大量的阳离子表面活性剂，将使石英毛细管壁带正电荷，溶液表面带负电荷。电渗流流向阳极。 电荷均匀分布，整体移动，电渗流的流动为平流，塞式流动（谱带展宽很小），应避免毛细管两端出现高度差而改变流形，降低分离效率； 液相色谱中的溶液流动为层流，抛物线流型，管壁处流速为零，管中心处的速度为平均速度的2倍（引起谱带展宽较大）。 电渗流的速度约等于一般离子电泳速度的5～7倍； 各种电性离子在毛细管柱中的迁移速度为： ?+ = ?e+ ?eo 阳离子运动方向与电渗流一致； ?- = ?e - ?eo 阴离子运动方向与电渗流相反； ν0 =ν ?eo 中性粒子运动方向与电渗流一致； （1）可一次完成阳离子、阴离子、中性粒子的分离； （2）改变电渗流的大小和方向可改变分离效率和选择性，如同改变LC中的流速； （3）电渗流的微小变化影响结果的重现性； 在HPCE中，控制电渗流非常重要。 (1)电场强度的影响 电渗流速度和电场强度成正比，当毛细管长度一定时，电渗流速度正比于工作电压。 (2)毛细管材料的影响 不同材料毛细管的表面电荷特性不同，产生的电渗流大小不同。 （a）溶液pH的影响 对于石英