(仪器分析）13.2分子荧光分析法.ppt

第十三章 分子发光分析法 13.2.1 仪器与结构流程 13.2.2 荧光分析方法与应用 一、仪器与结构流程 仪器光路图 仪器框图 同步扫描技术 可获得三维光谱图的仪器 二、荧光分析方法与应用 2.定量依据与方法 （2）定量方法 3.荧光分析法的应用 内容选择 第二节 分子荧光分析法 Molecular luminescence analysis Molecular fluorescence analysis 测量荧光的仪器主要由四个部分组成：激发光源、样品池、双单色器系统、检测器。 特殊点：有两个单色器，光源与检测器通常成直角。 基本流程图： 单色器：选择激发光波长的第一单色器和选择发射光(测量)波长的第二单色器。 光源：灯和高压汞灯，染料激光器(可见与紫外区)。 检测器：光电倍增管。 该型仪器可进行荧光、磷光和发光分析。 根据激发和发射单色器在扫描过程中彼此间所保持的关系，同步扫描可分为固定波长差(??)和固定能量差及可变波长三种。 同步扫描技术可简化光谱。谱带变窄，减少光谱重叠，提高分辨率。 合适的??可减少光谱重叠。酪氨酸和色氨酸的荧光激发光谱相似，发射光谱严重重叠，但??15 nm的同步光谱只显示酪氨酸特征光谱； ??60 nm时，只显示色氨酸的特征光谱，实现分别测定。 可获得激发光谱与发射光谱同时变化时的荧(磷)光光谱图。 1. 特点 （1）灵敏度高 比紫外-可见分光光度法高2～4个数量级；为什么？ 检出限：0.1～0.001?g·mL-1 相对灵敏度：0.05mol·L-1 奎宁硫酸氢盐的硫酸溶液。 （2）选择性强 既可依据特征发射光谱，又可根据特征吸收光谱； （3）试样量少 缺点：应用范围小。 (1) 定量依据 荧光强度 If正比于吸收的光量Ia和荧光量子效率? ： If = ? Ia 由朗-比耳定律： Ia = I0(1-10-? l c ) If = ? I0(1-10-? l c ) = ? I0(1-e-2.3? l c ) 浓度很低时，将括号项近似处理后： If = 2.3 ? I0 ? l c = Kc 标准曲线法： 配制一系列标准浓度试样，测定荧光强度，绘制标准曲线，再在相同条件下测量未知试样的荧光强度，在标准曲线上求出浓度。 比较法： 在线性范围内，测定标样和试样的荧光强度，比较。 (1)无机化合物的分析 与有机试剂配合物后测量；可测量约60多种元素。 铍、铝、硼、镓、硒、镁、稀土常采用荧光分析法； 氟、硫、铁、银、钴、镍采用荧光熄灭法测定； 铜、铍、铁、钴、锇及过氧化氢采用催化荧光法测定； 铬、铌、铀、碲采用低温荧光法测定； 铈、铕、锑、钒、铀采用固体荧光法测定。 (2)生物与有机化合物的分析 见表。 结束 13.1 分子荧光与磷光分析原理 13.2 分子荧光分析法 13.3 分子磷光分析法 13.4 化学发光分析 * *