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炙甘草汤颗粒中甘草酸含量测定 　　摘要：目的：利用超高效液相色谱UPLC测定炙甘草汤颗粒中甘草酸的含量。方法：色谱柱为UltimateTM AQ-C18（4.6×150mm，5μm），以乙腈-0.2%磷酸（34：66）为流动相，检测波长为250nm，流速为1.0ml·min-1。结果：甘草酸单铵盐对照品浓度在0.1059～1.6940 mg·ml-1范围内线性关系良好，回归方程为：Y= Y= 811011X-10261（n=5， r=0.9998），平均加样回收率为99.19%。结论：本方法准确可靠，可作为炙甘草颗粒质量量控制的检测方法。 关键词：炙甘草汤 甘草酸 超高效液相色谱 炙甘草汤最早见载于东汉张仲景所著《伤寒论·辨太阳病脉证并治下》，是阴阳两补的名方代表，其由炙甘草、生姜、人参、生地黄、桂枝、阿胶、麦门冬、麻仁、大枣等九味药材组成，用于治疗伤寒，脉结代，心动悸等症候疾病[1]。现代药理研究表明，炙甘草汤对多种实验性心律失常具有治疗作用，对心悸、早搏、冠心病等心脏疾病具有良好的临床治疗效果[2]。炙甘草汤的君药是炙甘草，甘草酸是炙甘草中的主要药效成分之一，具有多样的药理活性，现行药典也将其作为质量控制成分[3]，因此测定炙甘草颗粒中的甘草酸具有重要的意义，建立的检测方法可为炙甘草汤颗粒提供质量控制提供实验依据。 1. 仪器与试药 Waters ACQUITY UPLCTM 超高效液相色谱仪（包括二元泵，PDA检测器，柱温箱，美国）；十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（UltimateTM AQ-C18，4.6×150mm，5μm）， XP504 DeltaRange分析天平（瑞士）；KQ-300GDV超声波处理器（昆山超声仪器有限公司）；Thermo Scientific Heraeus Pico 17/21 Fresco（美国）； 乙腈（色谱纯）、水（双蒸水），其它为分析纯。 甘草酸单铵盐对照品（含量测定用，批号：110731-201012，中国药品生物制品检定所提供），炙甘草汤配方颗粒（批号：110620）及缺炙甘草药材的炙甘草汤颗粒阴性样品由实验室自制。 2. 色谱条件与系统适用性试验 2.1 色谱条件 色谱柱为UltimateTM AQ-C18（4.6×150mm，5μm；以乙腈-0.2%磷酸（34：66）为流动相；检测波长为250nm；柱温：30℃；流速1.0ml/min。理论塔板数按甘草酸峰计算应不低于5000。 2.2 溶液的制备 2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取甘草酸单铵盐对照品8.47mg，置于5ml的量瓶中，加稀乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为1.694mg/ml的对照品溶液，折合甘草酸浓度为1.654mg/ml。 2.2.2 供试品溶液的制备 取本品，研细，精密称取细粉约1.5g，置于具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，称定重量，超声处理（250W，40kHz）30分钟，取出放冷，称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，续滤液用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得。 2.2.3 阴性样品溶液的制备 取缺炙甘草药材的炙甘草汤颗粒阴性样品，精密称取细粉约1.5g，置于具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，称定重量，超声（250W，40kHz）处理30分钟，取出放冷，称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，续滤液用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得。 2.3 方法学考察 2.3.1 专属性考察 分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各5μl进样。在上述系统适应性的色谱条件下，供试品中甘草酸色谱峰与对照品色谱峰保留时间一致，并与其它成分分离度大于1.5，达到基线分离，且阴性样品在相应的位置没有色谱峰干扰。色谱图见图1、2、3。 2.3.2 线性范围的考察 精密称取甘草酸单铵盐对照品8.47mg，置于5ml的量瓶中，加稀乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，浓度为1.694mg/ml，精密量取上述对照品溶液2.5ml，置于5ml，的量瓶中，加稀乙醇稀释至刻度，摇匀，即得浓度分别为0.847mg/ml的对照品溶液，按该法连续稀释分别得到0.4235mg/ml、0.2118mg/ml、0.1059mg/ml的对照品溶液。 分别精密吸取上述对照品溶液各5μl，按上述色谱条件测得峰面积积分值，以进样量（mg/ml）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，做线性回归。结果表明：甘草酸单铵盐在进样量0.1014～1.6940 mg·ml-1范围内时，进样量与甘草酸面积呈良好的线性关系。回归方程为：Y= Y= 811011X-10261（n=5， r=0.9998）上述试验结果详见表1。