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谷物与豆类中粗蛋白质测定方法探究 　　【摘 要】国家标准GB/T5511—2008规定，谷物和豆类中粗蛋白质含量测定方法为凯氏定氮法。该方法适用范围广泛，测定结果准确，重现性好，但因其称样量大，消化时间长，蒸馏前需要定容稀释，操作复杂费时，试剂消耗大，给测定带来一定麻烦甚至是误差。就如何缩短消化时间，方便、快捷、准确地获得最佳测定结果，本人在称样量、所加试剂的浓度以及吸收液的酸碱度方面进行了大胆的尝试与探析。 【关键词】谷物和豆类中粗蛋白质；测定方法 1.方法原理 蛋白质是含氮的有机化合物，样品与硫酸和硫酸铜、硫酸钾一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后，以硫酸或盐酸标准滴定液滴定，根据酸的消耗量乘以蛋白质换算系数，即为蛋白质含量。 2.试剂与仪器 2.1浓硫酸混合液 在100ml水中缓慢加入浓硫酸200ml，冷却后加入30%过氧化氢300ml，混合均匀。 2.2混合催化剂 硫酸铜10g，硫酸钾100g，硒粉0.2g，在研钵中研细过孔径0.45mm（40目筛），混匀备用。 2.3混合指示剂 2份甲基红乙醇溶液（称取0.1g甲基红置于研钵中加入少许95%乙醇，研磨溶解后，加入75ml95%乙醇）与1份次甲基蓝乙醇溶液（0.1g次甲基蓝溶于80ml95%乙醇中）临用时混合。 2.4 20g/l硼酸溶液 称取20g硼酸溶于1000ml水中。 2.5饱和氢氧化钠溶液 2.6 0.01mol/l盐酸标准溶液 2.7仪器 凯氏定氮蒸馏装置。 3.操作步骤 3.1消化 称取0.050g左右（全部通过40目筛的）固体试样，移入50ml或100ml定氮瓶中，加入1g混合催化剂，再加入3ml浓硫酸混合液，稍摇匀后于瓶口放一小漏斗，以45度角斜支于有石棉网的电炉上。小火加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止，烟雾变白后，加强火力，保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热10min，取下放冷备用。同时做试剂空白试验。 3.2蒸馏 连接好定氮蒸馏装置，于水蒸气发生瓶内装水至2/3处，加数粒玻璃珠，加甲基红次甲基蓝指示液数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水至沸腾，反应室清洗干净后，即放缓加热至反应室内的残液不倒吸为宜，向接收瓶内加入10ml硼酸溶液及1-2滴混合指示液，并使冷凝管下端插入吸收瓶液面下，将定氮瓶中消化液用蒸馏水少量多次冲冼，使之全部干净地转移至反应室中，清洗进样口管路，塞紧棒状玻塞，加水封严。加热，待反应室内有热气进入，立即打开碱液管活塞加入饱和氢氧化钠至溶液呈现深褐色，停止加入，拧紧活塞，开始蒸馏。待吸收瓶中溶液出现绿色记时5min，到时后将接收瓶放低，继续蒸馏1min，用蒸馏水冲洗冷凝管下部。 3.3滴定 取下接收瓶，以硫酸或盐酸标准滴定液滴定至淡紫色（灰红色）为终点，同时做试剂空白试验。 3.4计算 试样中蛋白质含量按下式计算： X=（V1-V0）×C×0.0140×F×100/m×（1-M） 式中： X——试样中蛋白质含量，单位为g/100g或g/100ml； V1、V0——试样、空白液消耗标准滴定液的体积，单位为ml； C——硫酸或盐酸标准滴定液浓度，单位为mol/L； 0.0140——1.0ml硫酸或盐酸标准滴定液相当的氮的质量， 单位为克； m——试样质量或体积，单位为克或毫升； F——氮换算为蛋白质的系数； M——试样水分% 4.试验方法探析 （1）称取的试样量由标准中规定的0.2-0.3g改为0.050g左右，可将消化时间由原来的2-3h缩短为40min，由于样品量减少还可免去消化液稀释定容带来的麻烦与误差。 不同称样量测试结果比对 不同称样量空白加标回收率测试比对 上述测试结果表明，对粗蛋白质含量较高的样品减小称样量，无论对结果的准确性还是重现性都无任何影响。这样既节省时间，提高工作效率，又降低了实验成本，降低了对环境的污染。 （2）氢氧化钠由400g/l改为饱和溶液。因为在蒸馏过程中，消化液中的硫酸铵若没有足够的碱来中和，很难使氨彻底分离出来，甚至导致整个测定失败。氢氧化钠在本方法中的作用有两个方面，一是中和样品消化液中剩余的酸，二是为氨的有效分离提供一个碱性环境。所以我们在尽量不增加反应室内液体体积的前提下，采取加入饱和氢氧化钠来保证氨的有效分离，彻底放出，得到可靠、准确的测定结果。（下转第184页） （上接第75页）（3）将20g/l的硼酸吸收液PH值调整为5.4左右。因甲基红和次甲基