枯草芽孢杆菌B332菌株对稻瘟病的防治效果及定殖作用研究.pdfVIP

第四届全国绿色环保农药新技术、新产品交流会暨第三届生物农药研讨会 枯草芽孢杆菌B一332菌株对稻瘟病的防治效果 及定殖作用研究 穆常青1‘2，刘雪。2，潘玮。2，陆庆光2，蒋细良1，朱昌雄件 (1中国农业科学院农业环境与可持续发展研究所北京100081 2中国农业科学院研究生院北京100081) 摘要：本文对枯草芽孢杆菌B．332菌株分别在盆栽水稻及田间对稻瘟病的防治效果进行了考察，同时测定了该菌 株在水稻上的定殖作用。结果表明，在盆栽水稻活体生物测定中，B一332的芽孢菌体悬浮液及发酵上清液对稻瘟病均 表现出较好的防治效果(50％以上)，当菌液与上清混合后其防治效果有加和作用。该菌株对稻瘟病的防治作用主要 在预防，其预防叶瘟的效果与接种稻瘟病菌时叶面已定殖的B一332菌株的数量有关，接种时水稻叶面上定殖的菌数 为1．25x104cfu／mm2时，其防治效果可以达到45．23％。在人工大量引入的情况下，该菌能够在水稻叶面上有效定殖 达21天以上，并且在叶面有10％病斑的情况下，检测到的标记菌株数量会更多。田间试验结果表明，芽孢浓度在lxl08 cfu／mL时，该菌株对水稻穗颈瘟的防治效果达57．2％，增产率达9．6％，且浓度在5x108cfu／mL时对螃蟹乃无毒性。 关键词：枯草芽孢杆菌B．332；水稻稻瘟；防治效果；定殖作用 水稻生产造成极大危害，曾被列为水稻三大病害之首u1。目前稻瘟病的防治主要依靠抗病品种及化 学农药，而二者又都有很难克服的弊端。从20世纪50年代开始，人们不断寻求控制稻瘟病的生物 subtilis)为代表的芽孢杆菌属(Bacillusspp．)用于植病生物防治发现它对植物病害有很好防治效 果，同时还有一定的增产作用，逐渐成为研究热点，并已有很多获得成功的实例H1。 枯草芽孢杆菌(Bacillus 中，人们对它的了解程度仅次于大肠杆菌(Escherichiacoli)，已成为多种研究的模式菌∞。。本文 瘟病菌的生长及孢子萌发都有很强的抑制作用，是具有生防潜力的菌株∞1。因此，本文进行了该菌 株对稻瘟病的防治效果及定殖作用的研究，期望能明确B一332菌株对稻瘟病的生防价值及应用的可 行性，并为今后对该菌的进一步研究奠定基础数据，也为实际应用提供理论依据。 l材料与方法 1．1稻瘟病菌及孢子悬浮液的制各 稻瘟病菌为91-17-2生理小种，由中国农业科学院作物所稻瘟病害实验室提供。稻瘟病菌用燕 1．2拮抗菌发酵上清液及芽孢菌体悬浮液的制备 心水稻病害实验室分离并保存。枯草芽孢杆菌经斜面活化后，接种一针于内装100mL营养肉汤培养 将B一332发酵液5000r／min4℃离心10min去菌体，得发酵上清液。 度芽孢菌体悬浮液，用血球计数板计数法计数并初步计算该芽孢液浓度，据此结果初步调节成所需 基金项目：中日合作项目 作者简介：穆常青，男，硕士研究生；+通讯作者，zhucxl20@163．com。 第四届全国绿色环保农药新技术、新产品交流会暨第三届生物农药研讨会 芽孢浓度待用，最后用平板计数法精确计数，计算芽孢浓度，并以平板计数所得浓度为准。 1．3稻苗培育 露白即可播种。选用灭菌的有机营养土，每盆干重509。为确保每盆能有10株壮苗，每盆播种12 粒种子，先在28℃温箱中光照培养2d以利发芽整齐，后于温室条件强阳光下培养，温度保持在 d 22。33℃，三叶前保持土壤潮湿，三叶期后泡水。培养至四叶一心时，即可进行接种试验，接种前3 施1％硫酸铵溶液作肥料，以利发病。 1．4盆栽活体防效的生物测定 B-332培养物的实际防效测定盆栽活体接种是在用塑料薄膜密封透光的保湿大水桶中进行的， 1．1X108cfu／mL两个浓度；去菌上清分别设1×稀释液和5X稀释液两个浓度；分别设清水和三环唑 配稻瘟孢子悬浮液，每重复接种1ⅡlL。接种后稻苗置于接种箱中黑暗培养10h再光照培养14h，然 后转移到室温中避光培养。接种后分别于第6d和8d调查每株第2、3、4片叶上的病情，计算病情 指数及防效…。 有加和作用设计了此实验，接种及调查统计方法同上，分别设①清水、②三环唑500×药剂、③5X