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大鼠窒息法心搏骤停脑复苏模型建立和评价 　　【摘要】目的 建立和评价大鼠窒息法心搏骤停脑复苏模型，探讨合适的窒息（AP）时间。方法 实验在中山大学心肺脑复苏研究所完成。126只雄性SD大鼠随机（随机数字法）分为假手术组和实验组，通过静脉注射维库溴铵诱导窒息心搏骤停，实验组根据窒息时间不同分为AP4、AP6和AP8组，分别于心搏停止后4、6、8 min给予机械胸外按压和同步通气复苏。记录复苏基本情况，复苏后1、3、7 d，检测脑含水量、NDS评分、MRI影像学改变、脑组织病理损伤和神经元凋亡。统计分析采用单因素方差分析或χ2检验，以P 　　【Key words】Cardiac arrest； Cardiopulmonary cerebral resuscitation； Asphyxia； Animal model； Brain water content； Neurodeficit scoring； Pathological injury； Rat 脑复苏效果是反映心肺复苏最终是否成功的关键，脑复苏动物模型是研究复苏后脑组织缺血损伤机制和治疗干预效果的工具。大鼠窒息法心肺复苏模型由于实验操作相对简单，复苏成功率较高，可以形成明显的心脑缺血性损害，为国内外研究机构广泛采用[1-5]。但目前各实验室由于设备条件、实验方法不同，构建的模型缺乏统一标准，影响了实验结果的可比性。另一方面，复苏后脑组织损伤程度与缺血时间紧密相关[6]，故此探讨确定大鼠心搏停止后脑组织缺血时间非常重要，既要使损伤达到一定程度，符合临床病理生理特点，又要保证复苏的成功率和动物远期生存率，维持模型的稳定性。本研究利用本所自行研制的动物心肺复苏装置，建立大鼠窒息法心搏骤停复苏模型，从复苏成功率、影像学、神经功能学、组织病理等多方面评价复苏动物的脑损伤严重程度，从而确定大鼠心搏停止后合适的缺血时间，为优化和完善标准的脑复苏动物模型提供实验依据。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 动物 本实验在中山大学心肺脑复苏研究所完成。126只SPF级雄性SD大鼠，体质量（400±50 ）g，由中山大学动物实验中心提供（许可证号SCXK（粤）2004-0011，粤监证字2008A063）。 1.1.2 主要试剂 戊巴比妥钠（美国Sigma公司）；维库溴铵（浙江仙琚制药厂）；苏木素、伊红（武汉博士德公司）；原位细胞死亡检测试剂盒（瑞士Roche公司）。 1.1.3 主要仪器 大鼠心肺复苏装置（中山大学心肺脑复苏研究所研制，国家发明专利号：ZL200610037154.3）；Windaq数据采集分析系统（美国DATAQ公司）；多导生理参数监护仪（美国Spacelab公司）；1.5T超导型MR机（荷兰Philips公司）。 1.2 方法 1.2.1 实验分组 实验动物随机（随机数字法）分为假手术组和实验组。假手术组6只大鼠，仅行手术操作，不进行窒息和心肺复苏。实验组分为AP4组、AP6组和AP8组，每组40只动物，窒息状态下三组心搏停止时间分别为4 min、6 min、8 min。 1.2.2 模型制备 参照本实验室既往研究方法[7]。SD大鼠术前晚禁食但不禁水，戊巴比妥钠45 mg/kg腹腔内麻醉，备皮，仰卧位固定。经口直视插入14号气管鞘管，接CO2分析仪监测呼气末二氧化碳分压。左股动脉置入23号PE-50聚乙烯管监测主动脉压。皮下穿刺针电极持续记录心电图。手术中用加热灯保持动物体温（37.0±0.5）℃，持续监测肛温。手术完成后，待大鼠生理参数稳定开始诱导窒息。经股动脉推注维库溴铵2 mg/kg，观察大鼠呼吸、心搏停止时间，心搏停止以动脉收缩压 　　2 结果 2.1 复苏基本情况 2.1.1 复苏存活率 AP4组复苏成功34只，所有大鼠存活超过24 h，24 h存活率85%；AP6组复苏成功32只，2只大鼠复苏后24 h内死亡，24 h存活率75%；AP8组复苏成功21只，3只大鼠复苏后24 h内死亡，24 h存活率45%。AP8组的ROSC率和24 h存活率较AP4组、AP6组显著降低（P0.05）。 2.1.2 复苏情况 三组动物的生理基线值及呼吸、心搏停止时间差异无统计学意义（P0.05）。AP8组ROSC时间、自主呼吸恢复时间较AP4组和AP6组明显延长（P0.05）。见表1。 2.2 脑含水量 各实验组大鼠复苏后1 d脑组织含水量开始升高，3 d时达到高峰，7 d时有所下降。AP8组1 d、3 d、7 d脑含水量较AP4组和AP6组升高（P0.05）。见表 2。 2.4 MRI影像学改变 复苏后1 d未见明显异常缺血信号；复苏后3 d，各实验组大鼠的海马和颞叶皮