刺五加皂苷对人乳腺癌细胞增殖以和侵袭相关分子表达影响.docVIP

刺五加皂苷对人乳腺癌细胞增殖以和侵袭相关分子表达影响 　　摘要：目的：观察刺五加皂苷（ASS）对人乳腺癌细胞MCF-7生长抑制作用，并研究其对肿瘤生长相关标记物血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor， VEGF）、转化生长因子（transforming growth factor，TGF）β1的表达以及蛋白激酶C（protein kinase C，PKC）的活性有无影响。方法：体外培养MCF-7细胞，分别用125、250、500μg/mL的ASS处理细胞72h。MTT法检测细胞的增殖，比色法检测乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）的释放情况。ELISA检测DNA片段化情况以及VEGF和TGF-β1的产生；无机磷法检测Na+-K+-ATP酶活性以及磷基转移法测得PKC活性。结果： ASS处理能呈剂量依赖性方式降低MCF-7细胞的活性以及Na+-K+-ATP酶活性（p 　　1.2.7 PKC活性的测定 根据参考文献提供的原理，利用一个能被PKC磷酸化的假底物间接测定PKC同工酶活性[9]。即，细胞处理结束后用4℃ PBS洗涤2次，1000 r·min-1离心后加入1ml缓冲液（50 mmol/L Tris-HCl，50 mmol/L β-巯基乙醇，10 mmol/L苯甲脒，5 mmol/L EDTA，1 mmol/L PMSF，pH 7.5）中重悬浮细胞。测定上清浓度后，根据试剂盒（EMD Biosciences）提供的方法测定PKC的相对激酶活性（λ=492nm）中进行悬浮。测定蛋白质浓度。根据商家的说明分析PKC的活性。 1.3 统计学分析 各分组所得计量数据采用均数±标准差（±S）表示，用SPSS10.0软件处理数据，组间比较采用方差分析。检验水准α=0.05， p 　　肿瘤的生长代谢、转移和复发与其中的微血管增加密切相关[12]。无论原发性或转移性肿瘤，其持续生长都必须依赖于新生血管的形成。抑制肿瘤血管新生对于乳腺癌治疗具有重要意义。VEGF和TGF-β1是血管生成因子[13]。VEGF及其受体（VEGFR）在乳腺癌组织中交正常乳腺组织表达明显增高[14]，与乳腺癌的生长、转移、复发密切相关。VEGF可以增加乳腺癌细胞的血液供应[15]，促使血管形成；TGF-β1可通过它的免疫抑制效应而促进乳腺癌的转移[16]。因此VEGF和TGF-β1低表达表明ASS能有效抑制乳腺癌细胞中血管生成和转移。 PCK的活化与肿瘤细胞信号传导途径有关，从而促进肿瘤的增殖和侵袭[17]。有研究显示，PCK的过度表达以及活性的增加可促进肿瘤细胞的转移。本研究证实125-500μg/mL的ASS处理可有效抑制PCK在乳腺癌细胞中的活化。这表明ASS可能潜在性地下调这些肿瘤生长相关通路的活性，从而延缓乳腺癌的进展。 总之，本研究证实ASS处理能通过增加DNA断裂、降低Na+-K+-ATP酶活性，从而促进乳腺癌细胞凋亡，并降低TGF-β1和VEGF的表达以及PCK的活性。这表明ASS是潜在的的抗癌药物，但作为一种抗乳腺癌治疗药物，癌细胞种类以及癌症的分期可能也有所不同。此外，虽然ASS作为一种治疗药物，在对人类进行应用时，其体内有效剂量以及安全性还需要进行进一步研究。 参考文献（References） [1] Glass，A.G.，Lacey，J.V.，Jr.，Carreon，J.D.and Hoover，R.N.Breast Cancer Incidence， 1980-2006： Combine Roles of Menopausal Hormone Therapy，Screening Mammography，and Estrogen Receptor Status.J Natl Cancer Inst 2007，99（15）：1152-1161. [2] Effect of Na+-K+-ATPase Expression on Proliferation and Invasion of Human Colorectal Cancer Cells[J]. Chinese Journal of Clinical Oncology， 2012， 39（3）： 121-125. [3] Clere N，Bermont L，Fauconnet S， et al.The human papillomavirus type 18 E6 oncoprotein induces vascular endothelial growth factor 121 （ VEGF121 ） transcription from thepromote