显微镜-生物学试验教学中心.PPTVIP

[作业]  一、比较四种特殊的光学显微镜。 （原理、构造、用途） 二、荧光显微镜的两种滤光片各起什么作用? 调焦: 打开光源，旋转集光器转盘，将“o”对准标示孔，使普通聚光器部分进入光路。先使用低倍相差物镜，按普通显微镜操作方法进行对光和调焦。 旋转环状光阑，使光阑的直径和孔宽与所使用的相差物镜相适应，如相差物镜为40 x时应用x40标示孔的光阑。 合轴调整: 拔出目镜，插入合铀望远镜，一边从望远镜内内观察，并用左手固定其外筒；一边用右手转动望远镜内筒使其下降，当对准焦点就能看到环状光阑的亮环和相板的黑环，此时可将望远镜固定住。再升降集光器并调节其下的螺旋使亮环的大小与黑环一致，然后左右前后调节环状光阑聚光器上的调节钮，使两环完全重合，如亮环比黑环小而位于内侧时，应降低集光器使亮环放大；反之，则应升高聚光器，使亮环缩小。如若升到最高限度仍不能完全重合，则可能是载玻片过厚之故，应更换。合抽调整完毕，抽出望远镜，换回目镜，按常规要领进行观察。在更换不同倍率的相差物镜时，每一次都要使用相匹配的环状光阑和重新合抽调整。使用油镜时，集光器上透镜表面与载玻片之间要同时加上香柏油。 王 亮 2014.2.24 实验内容 普通及特殊光学显微镜的结构及使用 DNA原位显示—Feulgen染色法 细胞内过氧化酶的显示 细胞融合 细胞膜的通透性 细胞凝集反应 细胞器的分离与观察 线粒体的超活染色与观察 细胞骨架的显示和观察 联会复合体的染色与观察 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动的观察 动物细胞培养 (综合实验) 期末40% 平时成绩60% 实验一 普通和几种特殊光学显微镜的结构及使用 [目的要求] 1、掌握普通光学显微镜的主要构造及其性能; 2、掌握低、高倍镜的正规使用方法，反复练习， 观察时保持两眼同时睁开和两手并用。 3、掌握各种特殊显微镜的原理、构造和用途。 [实验用品] 光学显微镜、四种特殊光学显微镜（暗视野显微镜，相差显微镜，荧光显微镜，倒置显微镜） [实验内容和方法] 一、普通光学显微镜 （一）构造： 机械部分 照明部分 光学部分 1. 机械部分 镜座、镜柱、镜臂、镜筒、调节器(粗调螺旋和细调螺旋)、物镜转换器(旋转盘)、载物台 2. 照明部分 ① 聚光器/集光器: a.聚光镜【增强照明度】 b.孔径光阑/彩虹光圈/光圈【调节通光量】 ②光源或反光镜 3.光学部分 ① 目镜：常备有2—3个目镜，上面刻有5x、10 x、15 x等符号以示其放大倍数，可选择使用，一般常用的目镜倍数为10 x。 ② 物镜 (显微镜分辨性能高低的关键部件) 主要性能指标——分辨率和放大率，分辨率的大小用数值孔径（镜口率）表示，其数值越大，表示分辨率越高，(如10/0.25,40／0.65和100／1.25) 。 （二）显微镜的使用方法 显微镜在使用前，应先检查一下它的各个部件是否完整和正常，并进行必要的清洁工作，然后将显微镜放置在自己左肩前方的实验台上，离桌子边缘3—6cm为宜，以便观察。 1.光路调中（p6，自学） 2.低倍镜的使用方法 1）转动物镜转换器选择所用物镜 2）放置玻片标本（推进器调节标本至通光孔中心，注意标本正反方向） 3）调节焦距（侧面注视物镜与玻片距离，勿压碎片子） 3.高倍镜的使用方法 1）一定要先在低倍镜下找到要观察的标本物像后，再把需要放大的部分移至视野正中，并把物像调节到最清晰的程度。 2）转动物镜转换器，转换到高倍镜头，慢慢转动细调节器至图像清晰。（高倍镜下勿使用粗调节器） 4.油镜的使用方法 1）转动物镜转换器，移开高倍镜，在要观察的部位的盖玻片上滴加一滴香柏油，转动油镜镜头，使其浸入油中。转动细调节器至图像清晰。 2）油镜使用完毕，先用拭镜纸蘸少许二甲苯或者混合液（乙醚：乙醇=7：3）将镜头上的油擦去，再用干拭镜纸擦拭。 （三）注意事项 拿显微镜时，要一手紧握镜臂，一手托住镜座，不要单手提拿，以防目镜或其他零件滑落。 显微镜不可放置在实验台边缘，以免碰翻落地。 不要随意取下部件，以免灰尘落入内部。 保持显微镜的清洁。光学和照明部分的镜面只能用擦镜纸轻轻擦拭，切勿用手指、手帕和绸布等擦摸。机械部分可用布擦拭。 显微镜使用完毕后，转动粗调上升镜筒或下降载物台，取下标本，转动转换器使物镜离开通光孔，下降镜筒或上升载物台，使接近物镜，垂直反光镜。 二、暗视野显微镜 (一)?? 原理和结构特点 原理:利用光学上的丁达尔现象设计的。 结构特点: 利用暗视野聚光器使光线改变途径，倾斜地照