糖尿病大鼠肺脏微循环通透性变化和其意义.docVIP

糖尿病大鼠肺脏微循环通透性变化和其意义 　　[摘要] 目的 观察实验性糖尿病大鼠肺脏微血管通透性的变化，为临床提供糖尿病肺病的形态学依据。 方法 雄性SD大鼠共60只，体重（220±20）g，按65 mg/kg的剂量一次性腹腔注射链脲菌素（STZ）来制备糖尿病大鼠模型，在成模即刻（0周）、成模后2、4、8、12周时分别随机抽取12只，通过干湿重法、尾静脉注入伊文思蓝（EB）并心脏灌注后在分光光度计下测肺组织OD值以及荧光显微镜下测其荧光量来了解肺脏微血管的通透性。另随机抽取12只大鼠作为正常组。 结果 ①与正常组比较，0周组、2周组糖尿病大鼠肺组织的干湿重稍有增加，但差异无统计学意义（P 0.05）。而4周组、8周组和12周组糖尿病大鼠出现了组织干湿重明显增加，差异有统计学意义（P 0.05）。从4周开始，糖尿病大鼠出现肺组织EB含量明显增加，差异有统计学意义（P 0.05）. The lung tissue wet-dry weight in 4 weeks group， 8 weeks group， 12 weeks group were all higher than those in normal group， the differences were statistically significant （P 0.05）. The lung tissue EB content in 4 weeks group， 8 weeks group， 12 weeks group were all higher than those in normal group， the differences were statistically significant （P 　　[Key words] Diabetes； Diabetic pulmonary disease； Microcirculatory disturbance ； Evans blue； Permeability 糖尿病的患病率日益增加，它可使心血管、肾、视网膜、神经等全身多个组织器官的结构与功能发生变化，由于它的致残、致死性并发症，目前已成为全球最关注的健康问题之一。20世纪70年代，Yeh等[1]首次提出肺脏可能是糖尿病的靶器官之一。糖尿病引起肺脏损害的假设在之后的国内外研究中得到了肯定[2-3]，并且也越来越受到人们的重视。然而到目前为止，糖尿病引起肺功能损害的原因仍未完全明确。糖尿病对心血管、肾、视网膜、神经等组织器官损害的基础病变是糖尿病微血管病变，而肺组织存在着丰富的结缔组织和血管系统，因此肺部微血管改变亦是糖尿病肺脏损害的病理基础，故而设计了本课题，旨在为临床提供糖尿病肺病的形态学依据，也为临床上预防和治疗糖尿病肺病提供新思路。 1 材料与方法 1.1 动物 选用健康雄性SD大鼠，体重200～240 g，平均（220±20）g，共72只，购于广东省动物实验中心，大鼠适应性喂养1周，动物房采用昼夜交替，时间为12 h/12 h，保证室内温度（22±2）℃，严格遵照遵义医学院的实验室管理制度要求。 1.2 药品与仪器 链脲菌素（STZ）：美国Sigma公司，cas 18883-66-4，由上海宝曼生物公司提供；多聚甲醛、伊文思蓝（Evans blue，EB）、甲酰胺均由上海宝曼生物公司提供。血糖仪及试纸、电子天平、平头针、头皮针、输液架、自动脱水机、自动包埋机、离心机、石蜡切片机、恒温水浴箱、烤箱、722分光光度计、荧光显微镜、大鼠固定器。 1.3 方法 1.3.1 实验性糖尿病大鼠模型的制备 健康雄性SD大鼠适应性喂养1周后，禁食不禁水12 h，以65 mg/kg的剂量经腹腔一次性注入新鲜配制的STZ溶液来制备糖尿病模型。72 h后，采取尾静脉取血测血糖，血糖16.7 mmol/L则入选为糖尿病模型。正常组的大鼠则腹腔内注射柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。成模后大鼠给予自由饮食，不用任何药物干预。 1.3.2 实验动物的分组 SD大鼠中随机选取12只作为正常组，腹腔注射等体积的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液；为防止大鼠造模失败及实验过程中死亡而造成的数据缺失，实验组大鼠的实际数量为67只，将它们全部造模后剔除造模不成功的大鼠，造模成功的大鼠则继续饲养，在0、2、4、8、12周时间点，分别随机选取12只作为该组的实验动物。各个实验组再随机分为两个区组，区组1的大鼠行心脏灌注，取下肺组织称其干湿重；区组2大鼠则尾静脉注入伊文思蓝，循环1 h后行心脏灌注，再在分光光度计下测肺组织的OD值、制作石蜡切片后在荧光显微镜下观察其荧光量。 1.3.3 干湿重法测肺脏组织的含水量 麻醉成