生物化学08.ppt

第8章 酶通论;一、酶催化作用的特点;1982??Cech和Altman发现四膜虫细胞大核期间26S?rRNA前体具有自我剪接功能。 Schultz与Lerner研制成功抗体酶。 Boyer和Wakler阐明ATP合成酶合成与分解ATP的分子机制。;（一）酶和一般催化剂的比较;（二）酶作为生物催化剂的特点;3．反应条件温和;５.酶活力可调节控制;（二）酶作为生物催化剂的特点（小结）;二、酶的化学本质及其组成;（二）酶的化学组成及类别;（２）相对专一性(Relative Specificity);２. 立体化学（异构）专一性;（２）几何异构专一性（geometrical specificity）;（二）酶的化学组成及类别（小结）;单体酶-monomeric enzyme：一般由一条肽链组成，如溶菌酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶等。但有的单体酶有多条肽链组成，如胰凝乳蛋白酶由3条肽链，链间由二硫键相连构成一个共价整体。 寡聚酶-oligomeric enzyme：由2个或2个以上亚基组成，亚基间??以相同也可不同。亚基间以次级键缔合。如3-磷酸甘油醛脱氢酶、乳酸脱氢酶、丙酮酸激酶等。 多酶体系-multienzyme system：由几种酶靠非共价键彼此嵌合而成。主要指结构化的多酶复合体如丙酮酸脱氢酶系、脂肪酸合成酶复合体等。;三、酶的命名和分类;（二） 国际系统命名法;（三）国际系统分类法及酶的编号;乙醇脱氢酶 EC1.1.1.1 乳酸脱氢酶 EC1.1.1.27 苹果酸脱氢酶 EC1.1.1.37 ? 第一个数字表示大类： 氧化还原 第二个数字表示反应基团：醇基 第三个数字表示电子受体：NAD+或NADP+ 第四个数字表示此酶的序号;◆国际分类的盲区：忽略了酶的物种差异和组织差异 SOD： EC1.15.1.1，只有一个名称和编号 2O2-+2H+→H2O2+O2 ? 三类不同的SOD： CuZn-SOD 真核生物细胞质中 Mn-SOD 真核生物线粒体中 Fe-SOD 同是CuZn-SOD，来自牛红细胞与猪红细胞的，其一级结构也有很大不同。 ★在讨论一个具体的酶时，应对它的来源与名称一并加以说明。;四、酶的专一性;（二）关于酶作用专一性的假说;诱导契合学说(1958年 D.Koshland－induced-fit hypothesis)：酶的活性中心在结构上具柔性，底物接近活性中心时，可诱导酶蛋白构象发生变化，这样就使酶活性中心有关基团正确排列和定向，使之与底物成互补形状有机的结合而催化反应进行。;诱导契合学说的要点;Zn;五、酶的活力测定和分离纯化;酶促反应速度的表示方法：单位时间、单位体积中底物的减少量或产物的增加量。 ;2.酶的活力单位;4.酶活力的测定方法;（1）分光光度法（spectrophotometry）：多利用产物在紫外或可见光部分的光吸收性质，选择适当波长，测定反应过程的进行情况。简便、节约时间和样品，可以检测nmol/L水平的变化。 （2）荧光法(fluorometry)：主要利用底物或产物的荧光性质。灵敏度高，但易受到干扰。 （3）同位素测定法：同位素标记底物，反应后经分离，检测产物的脉冲数，即可换算成酶的活力单位。灵敏度最高。 （4）电化学方法：pH计、 氧电极法 ;（二）酶的分离和纯化;六、核 酶(ribozyme);rRNA基因的转录产物即rRNA前体（大约6400个核苷酸残基）很不稳定，在鸟苷和Mg2+存在下切除自身的内含子（intron或intervening sequence,IVS-居间序列或间插序列），使两个外显子(exon)拼接起来，形成成熟的rRNA——此过程没有任何蛋白质酶参与，称为自我剪接（self-splicing）,并证明RNA具有催化活性。;;Ribozyme在一定条件下，高度专一地催化下列反应，具有相应酶的活性（底物专一、符合米氏方程、对竞争性抑制剂敏感） 1.核苷酸转移酶活性 2CpCpCpCpC?CpCpCpCpCpC+CpCpCpC 2.磷酸二酯酶活性 CpCpCpCpC ?CpCpCpC+Cp 3.磷酸转移酶活性 CpCpCpCpCpCp+UpCpU ?CpCpCpCpCpC +UpCpUp 4.RNA限制性内切酶活性 另外，1997年，Zhang和Cech证明了人工合成的RNA分子具有肽基转移酶活性。;Ribozyme发现的重大意义：;七、抗体酶（abzyme）; O – C –;抗体酶的筛选;抗体酶的研究和应用前景;八、酶工程简介;（二）化学酶工程;3.固定化酶;（三）生物酶工程;