人α-防御素5前体蛋白在毕赤酵母中分泌表达的研究 secreted expression of human alpha-defensin-5 preproprotein in p ichia pastoris.pdfVIP

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2017-11-22 发布于上海
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人α-防御素5前体蛋白在毕赤酵母中分泌表达的研究 secreted expression of human alpha-defensin-5 preproprotein in p ichia pastoris.pdf

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人α-防御素5前体蛋白在毕赤酵母中分泌表达的研究 secreted expression of human alpha-defensin-5 preproprotein in p ichia pastoris

现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2010, Vol.26, No.11 人 α-防御素5前体蛋白在毕赤酵母中分泌表达的研究汪芳 1 1 2 1 1 1 2 1 ，吴晖，李健兴，余以刚，李晓凤，袁琨，王少沛，唐语谦（1.华南理工大学轻工与食品学院，广东广州 510640）（2.广州清绿健康科技发展有限公司，广东广州 511400）摘要：为了探索人α-防御素5 （HD5 ）前体蛋白基因在酵母中高效分泌表达的可行性，将其对应基因克隆到载体pPIC9K ，得到重组载体pPIC9K-preproHD5 ，经SacI线性化后，转入Pichia pastoris GS115 ，得到重组毕赤酵母菌GS115/pPIC9K-preproHD5。应用PCR 技术筛选高拷贝转化株，用BMGY培养GS115/pPIC9K-HD5 至OD600 为2~6 时，用BMMY诱导培养120 h ，离心取上清液，用 Tricien-SDS和蛋白定量试剂盒分析人α-防御素5前体蛋白的表达量。琼脂扩散法检测人α-防御素5前体蛋白的抑菌活性，发现其对金黄色葡萄球菌（ATCC6538 ）和大肠杆菌（ATCC10231 ）2种标准菌株具明显的抑菌活性。人α-防御素5前体基因可在毕赤酵母实现分泌型表达，该策略可能成为防御素工业化开发的有效途径。关键词：人 α-防御素5 前体蛋白；分泌表达；生物活性文章篇号：1673-9078(2010)11-1181-1184 Secreted Expression of Human alpha-defensin-5 Preproprotein in P ichia pastoris 1 1 2 1 1 WANG Fang , WU Hui , LI Xing-jian , YU Yi-gang , LI Xiao-feng 1 2 1 YUAN Kun , WANG Shao-pei , TANG Yu-qian (1.College of Light Industry and Food Sciences, South China University of Technology, Guangzhou 510640, China) (2.C.G.F. Health Technology Development Co., Ltd, Guangzhou 511400, China ） Abstract: To explore the feasibility of high-level secretion expression of bioactive human alpha-defensin-5 preproprotein (preproHD5) in Pichia pastoris, DNA fragment containing preproHD5 was inserted into the yeast expression vector pPIC9K successfully. The recombinant vector pPIC9K-preproHD5 was linearized with enzyme SacI a