仿刺参体腔细胞染色方法的研究.pdfVIP

第23卷第2期 大 连 水 产 学 院 学 报 Vol.23 No.2 20 0 8 年4 月 JOURNAL OF DALIAN FISHERIES UNIVERSITY Apr . 2008 文章编号:1000-9957(2008)02-098-06 仿刺参体腔细胞染色方法的研究 陈摇 静,摇 李摇 华,摇 吴 艳 辉,摇 陈摇 辉 (大连水产学院农业部海洋水产增养殖学与生物技术重点开放实验室,辽宁 大连 116023) 摘要:通过改变固定时间、 孵育时间、 染色时间及温度、 分色方式等染色条件, 研究不同染料、 不同染色 条件对仿刺参Apostichopusjaponicus体腔细胞的染色效果, 并以观察体腔细胞内的颗粒、 细胞核、 细胞质和 伪足的着色情况和细胞整体轮廓清晰程度为标准, 筛选了适用于仿刺参体腔细胞的理想染色方法。 结果表 明:25 益室温下, 采用滴片制片法, 用湿盒孵育15~30 min, 用甲醇固定1~2 min,用渍(Wright蒺s) 颐渍(Gi鄄 emsa)= 1 颐1的混合液染色1~2 min,水洗,用中性树胶封片,在此条件下对仿刺参体腔细胞的染色效果最好。 关键词:仿刺参; 体腔细胞; 染色方法 中图分类号: Q24摇 摇 摇 摇 文献标志码: A 摇 摇 仿刺参Apostichopusjaponicus 俗称刺参, 是我 Giemsa染液摇 取 Giemsa粉末0郾38 g, 加入甲 国重要的经济棘皮动物。 海参类具有其特殊的血系 醇 (中性) 37郾5 mL、 体积分数为40%的甘油12郾5 统和围血系统。 有学者认为, 海参体腔液类似于血 mL, 在研钵中研磨混合后, 置于37 益下温箱中48 [1] 液, 体腔细胞是由血管壁产生的 。 体腔细胞是 h 即成基液。 染色时, 将0郾3 mL基液与10 mLPBS 其免疫系统的主要组成部分, 在细胞免疫和体液免 缓冲液 ( pH7郾4) 混合后使用。 [2-3] 疫中均起着重要作用 。 仿刺参体腔细胞悬浮于 伊红染液摇 取伊红0郾1g溶于100 mL 甲醇中。 体腔液内, 而体腔液与外界海水相通。 用常规的涂 瑞氏-姬姆萨混合染液摇 将 Wright蒺s 氏染液和 片染色方法, 不仅得不到理想的体腔细胞涂片, 而 Giemsa染液按一定比例混合。 且由于着色效果差, 无法分辨各类体腔细胞。 本试 1郾2摇 方法 验中, 作者比较了不同染料、 不同染色条件对仿刺 参体腔细胞的染色效果, 以期找出适合于仿刺参体 1郾2郾1摇 细胞涂片制作及染色摇 用1mL无菌注射器 腔细胞的涂片方法、 染色方法和染色条件, 为细胞 从仿刺参体壁插入抽取体腔液, 按文献 [4] 中的 免疫研究提供一定的参考资料。 方法迅速制成涂片, 室温下干燥。 经甲醇固定, 分 1摇 材料与方法 别用Wright蒺s 氏染液、 Giemsa染液、 瑞氏-姬姆萨 混合染液染色或直接水洗, 或染色后用3种不同分 1郾1摇 材料 色方式分色后水洗。 各种染色条件如下: 孵育时间 试验用仿刺参购自大连市兴工街水产品市场, 为5、 10、 15、 30、 60 min; 混合染液 比例为 体重为(7