一种体外快速分离脂肪来源干细胞的方法.pdfVIP

第 2 6 卷第 1 期 激 光 生 物 学 报 Vol. 26 No. 1 2 0 1 7 年 2 月 ACTA LASER BIOLOGY SINICA Feb.2017 doi ：10.3969/j. issn. 1007-7146.2017.01.014 一种体外快速分离脂肪来源干细胞的方法 郭淑军“2,3,4,5, 刘 伟 “2,3,4,5, 金 媛 “2,3,4,5, 王 强 “2,3,4,5,李 雅 丹 “2,3,4,5,陈 小 佳 “2,3,4,5* ( 1 . 暨南大学生物医药研究院，广 东 广 州 510632; 2 . 暨南大学细胞生物学系，广 东 广 州 510632; 3 . 基因工程药物国家工程研究中心，广 东 广 州 510632; 4 . 广东省生物工程药物重点实验室，广 东 广 州 510632; 5 . 广东省生物技术药物工程技术研究中心，广 东 广 州 510632) m 要 ：目的：以小鼠为模型，建立一种基于流式细胞仪为检测手段的快速分离脂肪来源干细胞的方法，解决 间充质干细胞进人实际应用过程中遇到的难题。方法：取 B A L B /c 小鼠腹股沟内侧的皮下脂肪组织，采 用 I 型 胶原酶消化等系列措施，获取脂肪干细胞（adlp〇se-denved stem cellS ，ADSCS) 。所得细胞分离培养4 代后，流式 细胞仪分选出CD73 + CD45- A D S & 后成骨诱导分化。碱性磷酸酶染色和实时荧光定量P C R 检测其分化情况。 结果：刚分离培养的A D S & 细胞普遍呈圆形或椭圆形，传至第三代的细胞，非 M S & 细胞逐渐被淘汰，剩余的细 胞形态逐渐变得一致，细胞形态呈梭形。流式细胞仪检测发现 A D SC s 细胞表面抗原标记 CD73 + CD45 - 为 2 0 .7 % 。所得的A D SC s 成骨诱导分化后碱性磷酸酶（ alkaline phosphatase, A L P ) 染色呈阳性，实时荧光定量PCR 检测成骨标志基因发现它们表达上调，其中 A L P 的表达高达2 2 倍。结论 :本方法可以获得纯度较高的A D S& , 且耗时少成本低;且提示可采用该方法来获得大量的人源A D SC s 用于组织工程修复。 关 键 词 ：脂肪；间充质干细胞；分离 中 图 分 类 号 ：R331 文 献 标 志 码 ： B 文 章 编 号 = 1007-7146 (2 0 1 7 ) 01 ~0091-06 One Easy Method to Isolate Adipose-Derived Stem Cells in vitro GUO Shujun1-2 -3 -4 -5 , LIU Weil -2 -3 A -5 , JIN Yuan1-2 -3 -4 -5 , WANG Qiangl -2 -3 A -5 , LI Yadan1'2'3'4'5* , CHEN XiaojiaK 2 -3 A ' 5 * (1 . Institute of Biomedicine, Jinan University, Guangzhou 510632 , Guangdong, China ； 2. Department of Cell Biology, Jinan University, Guangzhou 5 1 0 6 3 2 , Gu