抑制Sema 4D表达介导的成骨前体细胞AKT磷酸化水平上调在乳腺癌骨转移中的作用.pdfVIP

第 46卷第 1期第 23页 华中科技大学学报 (医学版) Vo1．46 No．1 P．23 2017年 2月 ActaMedUnivSciTechnolHuazhong Feb． 2017 抑制 Sema4D表达介导的成骨前体细胞 AKT 磷酸化水平上调在乳腺癌骨转移 中的作用* 王 振 ， 赵永强， 刘继军 ， 金 毅 ， 陈 骁 ， 郑 稼△ 河南省人民医院骨科 ，郑州 450003 摘要 ：目的 探讨抑制 Sema4D介导的成骨前体细胞 AKT磷酸化水平上调在乳腺癌骨转移 中的作用 。方法 通 过 siRNA技术构建稳定的Sema4D低表达人乳腺癌 MCF-7细胞株 ，采用实时荧光定量 PCR检测细胞 Serea4DmRNA 表达 ，MTT法检测各组细胞增殖能力，Transwell法检测各组细胞侵袭能力；采用Transwell小室建立成骨细胞和乳腺癌 细胞 的共培养体系，茜素红染色实验检测骨矿化能力 ，Westernblot检测 AKT、p-AKT蛋 白表达 。结果 MCF-7细胞 Sema4DmRNA相对表达量显著高于 Hs578Bst细胞(PO．05)。Sema4DsiRNA转染后 ，Sema4DsiRNA组 Sema4D mRNA相对表达量显著低于 Control组和 NC组(均 P0．05)，Control组和 NC组 Sema4DmRNA相对表达量 比较 ，差 异无统计学意义 (PO．o5)。Sema4DsiRNA组细胞增殖率显著低于 NC组和 Control组 (均 P0．05)，Serea4DsiR— NA组细胞侵袭率亦显著低于 NC组和 Control组(均 P0．05)。MCF-7+OM组和 Sema4DsiRNA+OM 组骨结节面 积显著低于 Control+OM 组 (均 P0．05)，Sema4DsiRNA+0M 组骨结节面积显著高于 MCF-7+OM 组 (均 P 0．05)。Control+OM 组 、MCF_7+0M 组 、Sema4DsiRNA+0M 组 AKT蛋 白表达水平 比较差异无统计学意义 (P 0．05)；MCF-7+OM组和 Sema4DsiRNA+OM 组 p-AKT蛋 白表达水平显著低于 Control+OM组 (均 P0．05)，Sema 4DsiRNA+OM组 p—AKT蛋 白表达水平显著高于 MCF-7+OM 组 (P0．05)。结论 人乳腺癌细胞系 MCF一7Sema 4D表达显著上调，并与细胞增殖、侵袭等生物学行为有关；下调 Sema4D表达，能够提高 AKT磷酸化水平，减弱对成骨 细胞分化的抑制作用 。 关键词 ：乳腺癌 ； 骨转移 ； 信号素 4D； 成骨分化 ； AKT磷酸化 中图分类号：R737．9 DOI：10．3870／j．issn．1672—0741．2017．01．006 RoleofInhibitionofSema4D—mediatedAKTPh0sphorylationofOsteogenic PrecursorCellsinBreastCancerBoneM etastasis WangZhen，ZhaoYongqiang，LiuJijunetal DepartmentofOrthopedics，HenanProvincialPeople’sHospital，Zhenzhou450003，China Abstract 0bjective ToexploretheroleofinhibitionofSema4D-mediatedAKT phosphory1ationofosteogenicprecursor cellsinbreastcancerbonemetastasis．Methods Thestablelow expressionofSema4D inhumanbreastcancercell1ineMCF-7 wasconstructedbvsiRNA techniqu