杂环胺人工抗原的合成以及多克隆抗体的制备.pdfVIP

※生物工程 食品科学 2017, Vol.38, No.04 45 杂环胺人工抗原的合成以及多克隆抗体的制备 王 静，马宁宁，宋 洋* （天津师范大学生命科学学院，天津市动植物抗性重点实验室，天津 300387 ） 摘  要：为建立适用于一类杂环胺的酶联免疫吸附检测方法（enzyme-linked immunosorbent assay ，ELISA ）， 2- -3,4,8- [4,5-f ]- 2-amino-3,4,8-trimethyl-3H -imidazo[4,5-f ] 利用改良的碳化二亚胺法将在 氨基 三甲基咪唑 喹喔啉（ quinoxaline 4,8-DiMeIQx 2- ， ）的 氨基处连接丁二酸单甲酯酰氯制备的半抗原偶联蛋白获得人工抗原。该方法利 pH 用适当 值的缓冲体系，将酯的水解和蛋白偶合一步完成，与传统方法相比，有效地节省了反应时间和成本， 且对人工抗原的紫外扫描验证和多克隆抗体效价检测结果都直接和间接地表明偶合是成功的。最终免疫获得 4,8-DiMeIQx 1 450 000 ，且经直接竞争ELISA检测，该抗体对目 结构类似物的多克隆抗体，该抗体的最高效价为 ∶ 标物4,8-DiMeIQx 的灵敏度（IC50 ）为24.0 μg/L ，最低检测限（IC15 ）为1.8 μg/L ，对其结构类似物7,8-DiMeIQx 、 8-MeIQx 2- -3- [4,5-f ]- IQx 2- -3,4,7,8- [4,5-f ]- TriMeIQx 、 氨基 甲基咪唑 喹喔啉（ ）、 氨基 四甲基咪唑 喹喔啉（ ）的灵 35.0 30.0 28.0 40.0 μg/L 2- -1- -6- 敏度分别为 、 、 、 ，而其他与目标物结构相差较大的杂环胺，像 氨基 甲基 苯基咪唑 [4,5-b] PhIP 2- -3- [4,5-f ] IQ 2- -3,4- [4,5-f ] 2-amino-3,4- 吡啶（ ）、 氨基 甲基咪唑 喹啉（ ）和 氨基 二氨基咪唑 喹啉（ dimethyl-imidazo[4,5-f ]quinoline MeIQ CR 0.01% ， ），它们几乎不与抗体结合（ ＜ ）。由此可见，可以利用该抗体建 立高效快速的杂环胺ELISA检测方法用以定量或定性检测肉类加工食品中的一类杂环胺。 关键词：杂环胺；半抗原；人工抗原；多克隆抗体；酶联免疫吸附检测方法 Preparation of Artificial Antigen and Polyclonal Antibody for the Detection of Heterocyclic Amines