生物化学 蛋白质化学1.ppt

概述 蛋白质的基本单位——氨基酸 肽 蛋白质的分子结构 蛋白质的性质 蛋白质及氨基酸的分离纯化与测定;第四章 蛋白质化学;第一节 概述;组成蛋白质的元素 组成蛋白质的元素有：C、H、O、N和S，这些元素在蛋白质中的组成百分比约为： C：50~55% H：6~8% O：20~23% N：15~18 % S：0~4% 其它(P、Cu2+、Mn2+ 、Fe3+等) 微量 蛋白质N平均含量为16%的特点作为凯氏（Kjedahl）定氮法测定蛋白质含量的计算依据。 蛋白质含量 = N含量×6.25 ;二、蛋白质的分类;;二、蛋白质的分类;二、蛋白质的分类;三、蛋白质的生物学功能;第二节 蛋白质的基本单位——氨基酸;第二节 蛋白质的基本单位——氨基酸;;不带电形式;二、氨基酸的结构特征;20种基本氨基酸;三、氨基酸的分类;三、氨基酸的分类;芳香族侧链氨基酸;组氨酸;三、氨基酸的分类;极性不带电氨基酸;带正电的氨基酸;带负电的氨基酸;四、氨基酸的性质;H3N—CH—COOH;甘氨酸的酸碱滴定曲线;甘氨酸的解离;等电点时，Glu主要以兼性离子(R0)存在，[R+]和[R-]很小而且相等，R2-的量可忽略不计。因此 pI=1/2(pK1’+pKR’);谷氨酸pI=3.22;等电点时，Lys主要以兼性离子(R0)存在，[R2+]的影响极小。因此 pI=1/2(pK2’+pKR’);组氨酸pI=7.59;pI = ————;;练习题;练习题;带芳香环侧链的氨基酸具有紫外吸收的能力，最大光吸收在280nm。 利用氨基酸的紫外吸收测定蛋白含量。; ;（1）?-氨基参与的反应 ①与亚硝酸反应：得到?-羟基酸并放出氮气。 是范斯来克法定量测定氨基酸的基本反应。 可以用氨基氮与总蛋白氮的比例表示蛋白质的水解程度。;3. 化学性质;③与2,4-二硝基氟苯(DNFB)的反应;3. 化学性质;;（2）?-羧基参与的反应 ①成盐反应：与碱作用生成盐，如谷氨酸一钠。 与重金属离子形成的盐不溶于水。;（2）?-羧基参与的反应;（3）氨基和羧基共同参与的反应;②成肽反应 缩合生成酰胺键，通常称为肽键。;（4）侧链基团的化学性质 ①巯基及二硫键： 可与苄氯、碘乙酰胺等结合，保护巯基。 两个巯基氧化形成二硫键-S-S-，相互可形成氧化还原体系，并且可以维持多肽分子和蛋白质分子结构。 ②羟基： 可与酸成酯，如丝氨酸或苏氨酸与乙酸、磷酸反应成酯。;巯基（-SH）的性质;第三节 肽;氨基酸的?-羧基与另一个氨基酸的?-氨基脱水形成肽。肽键是蛋白质分子中氨基酸连接的基本方式。肽键相连构成了蛋白质的主链。; ;肽(peptide ) 氨基酸之间通过肽键联结起来的化合物称为肽。两个氨基酸形成的肽叫二肽，三个氨基酸形成的肽叫三肽……，十个氨基酸形成的肽叫十肽，一般将十肽以下称为寡肽(oligopeptide)，以上者称多肽(polypeptide)或称多肽链。 氨基酸残基(amino acid residues ) 肽链中的氨基酸在参加肽键形成时失去了1分子水，已经不是原来完整的分子，称为氨基酸残基。;一条肽链通常含有一个游离的?-氨基端(N-末端)和一个游离的?-羧基端(C-末端)。 规定肽链的氨基酸排列顺序从其N-末端开始，到C-末端终止。常把N-末端氨基酸残基放在左边，C-末端氨基酸残基放在右边。 小分子肽一般按其氨基酸残基排列顺序命名，如：Tyr-Gly-Gly-Phe-Met称为：酪氨酰甘氨酰甘氨酰苯丙氨酰甲硫氨酸（脑啡肽）。;二、 生物活性肽 1. 谷胱甘肽——参与体内氧化还原反应;2.神经肽——神经肽与神经体液调节;3.抗菌肽——细菌的一种防御武器;第四节 蛋白质的分子结构;; 蛋白质的一级结构是指蛋白质中氨基酸的排列顺序。;;1953年英国Sanger等人，完成了牛胰岛素(Insulin)一级结构测定工作，分子量为5700D，有A链(21Aa)和B链(30Aa)两条肽链，两个链间二硫键和一个链内二硫键(A链)。;2.一级结构的测定——氨基酸序列的自动程序测定;2.一级结构的测定;一级结构的测定方法;黄色;B. Edman法：生成苯乙内酰硫脲衍生物，通过层析法分离鉴定，Edman首先用此反应鉴定多肽的N-端AA。;C. 丹磺酰氯法：在碱性条件下，得到丹磺酰-氨基酸。优点是丹磺酰-氨基酸有很强的荧光性质，检测灵敏度可以达到1?10-9mol。;D. 氨肽酶法： 一种肽链外切酶，它能从多肽链的N-端逐个的向内水解。 根据不同的反应时间测出酶水解所释放出的氨基酸种类和数量，按反应时间和氨基酸残基释放量作动力学曲线，从而知道蛋白质的N-末端残基顺序。 最常用的氨肽酶是亮氨酸氨肽