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一)、半保留复制的实验依据和意义 DNA生物合成时，母链DNA解开为两股单链，各自作为模板(template)按碱基配对规律，合成与模板互补的子链。子代细胞的DNA，一股单链从亲代完整地接受过来，另一股单链则完全从新合成。两个子细胞的DNA都和亲代DNA碱基序列一致。这种复制方式称为半保留复制。 真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子的复制。 习惯上把两个相邻起始点之间的距离定为一个复制子(replicon) 。复制子是独立完成复制的功能单位。 三)、双向复制 原核生物复制时，DNA从起始点(origin)向两个方向解链，形成两个延伸方向相反的复制叉，称为双向复制。 一)、DNA聚合酶 全称：依赖DNA的DNA聚合酶 (DNA-dependent DNA polymerase) 简称：DNA-pol 聚合反应的特点 DNA 新链生成需引物和模板； 新链的延长只可沿5? → 3?方向进行 。 DNA-pol的核酸外切酶活性和及时校读 复制的保真性和碱基选择 ? DNA聚合酶靠其大分子结构协调非共价（氢键）与共价（磷酸二酯键）键的有序形成。 ? 嘌呤的化学结构能形成顺式和反式构型，与相应的嘧啶形成氢键配对，嘌呤应处于反式构型。 TTGGGGTTGGGGTTGGGG 5’ 5’ TTGGGGTTGGGGTTGGGG CCAACCCC 3’ 5‘ oH3’ 5’ CCAACCCC 3’ 5’ TTGGGGTTGGGGTTGGGG CCAACCCC 2.聚合 1. 结合 3.移位 爬行模式 端粒酶的功能 TTGGGG TTGGGG CCAACCCC 染色体DNA 端粒 末端补齐机制： 5‘ GGGGTT （GGGGTT）n 端粒酶 5’ G-G配对回折 3‘ 5’ DNA聚合酶 细胞分裂 细胞分裂 细胞衰老 端粒酶 永生化 抗肿瘤靶点 真核生物的DNA聚合酶 3 复制保真性的酶学依据 复制按照碱基配对规律进行，是遗传信息能准确传代的基本原理。 复制保真性的酶学机制： （1）DNA-pol的核酸外切酶活性和及时校读 （2）复制的保真性和碱基选择 A：DNA-pol的外切酶活性切除错配碱基；并用其聚合活性掺入正确配对的底物。 B：碱基配对正确， DNA-pol不表现活性。 1. 遵守严格的碱基配对规律； 2. 聚合酶在复制延长时对碱基的选择功能； 3. 复制出错时DNA-pol的及时校读功能。 DNA复制的保真性至少要依赖三种机制 二）解螺旋酶、引物酶和单链DNA结合蛋白 解螺旋酶(helicase) ——利用ATP供能，作用于氢键，使DNA双链解开成为两条单链 引物酶(primase) ——复制起始时催化生成RNA引物的酶 单链DNA结合蛋白(single stranded DNA binding protein, SSB) ——在复制中维持模板处于单链状态并保护单链的完整 10 8 局部解链后 三）DNA拓扑异构酶(DNA topoisomerase) 解链过程中正超螺旋的形成 目 录 拓扑异构酶作用特点 既能水解 、又能连接磷酸二酯键 拓扑异构酶Ⅰ 拓扑异构酶Ⅱ 分 类 拓扑异构酶Ⅰ 切断DNA双链中一股链，使DNA解链旋转不致打结；适当时候封闭切口，DNA变为松弛状态。 反应不需ATP。 拓扑异构酶Ⅱ 切断DNA分子两股链，断端通过切口旋转使超螺旋松弛。 利用ATP供能，连接断端， DNA分子进入负超螺旋状态。 作用机制 四)、DNA连接酶 连接DNA链3?-OH末端和相邻DNA链5?-P末端，使二者生成磷酸二酯键，从而把两段相邻的DNA链连接成一条完整的链。 DNA连接酶(DNA ligase)作用方式 HO 5’ 3’ 3’ 5’ DNA连接酶 ATP ADP 5’ 3’ 5’ 3’ 目 录 DNA连接酶在复制中起最后接合缺口的作用。 在DNA修复、重组及剪接中也起缝合缺口作用。 也是基因工程的重要工具酶之一。 功能 DNA生物合成过程 The Process of DNA Replication 三 （一）复制的起始 需要解决两个问题： 1. DNA解开成单链，提供模板。 2. 合成引物，提供3?-OH末端。 E.coli复制起始点 oriC 串联重复序列 反向重复序列 5? 3? 5? 3? 1. DNA解链 Dna A Dna B、 Dna C DNA拓扑异构酶 引物酶 SSB 3? 5? 3? 5? 2. 引发体和引物 含有解螺旋酶、DnaC蛋白、引物酶和DNA复制起始区域的复合结构称为引发体。 3? 5? 3? 5? 引物是由引物酶催化合成的短链RNA分子