高效液相色谱柱后衍生法检测啤酒中黄曲霉毒素的研究.pdfVIP

康迪，消毒专家 3164147传真：3178661 总机13633-3178瞄0 h∞：，M^～ktmdycnE+rna¨：kondy97@163COlT 肠康迪日用化工有限公司 ·46· ●■■■r 【摘要】现在大多数检测黄曲霉毒素的方法，如酶联免疫测试盒、免疫亲和层析净化荧光光度法等，都只能 检测单一的黄曲霉毒素B，或黄曲霉毒素总量，而且检测限高，重复性和稳定性不好，难以得到理想的测试结果。 本文主要研究啤酒样品经pH7．0磷酸盐缓冲溶液调节pH值后，用含有黄曲霉毒素特异抗体的免疫亲和层析柱 净化富集，黄曲霉毒素交联在层析介质的抗体上，用吐温一20／PBS将免疫亲和柱上杂质除去，再以甲醇通过免 疫亲和层析柱洗脱，洗脱液经C。。柱分离。然后用液相色谱柱后衍生法，用荧光检测器进行检测。本方法可同 时分离检测出黄曲霉毒素B1、B：、G，和G2，检测限可达0．2“g／L。 【关键词】黄曲霉毒素 高效液相色谱免疫亲和层析柱柱后衍生 前言 1．2主要仪器 黄曲霉毒素分为B族和G族两大类及其 黄曲霉毒素免疫亲和柱、注射器、高效液 衍生物，目前已发现有20余种，黄曲霉毒素 的主要分子型式含B。、B2、G．、G2、M。和国PickeringVector)。 M：等，其中M。和M：为奶牛代谢产物，主 1．3啤酒样品预处理及富集氧化 要存在于牛奶中。黄曲霉毒素(Aflatoxins)准确移取10．OraL已除气的啤酒样品到 是黄曲霉和寄生曲霉的代谢产物，产生的黄 曲霉毒素主要有B，、B2、G，和G：。黄曲霉酸盐缓冲液，混匀。 毒素被世界卫生组织(WHO)的癌症研究 将免疫亲和柱连接于10．OmL玻璃注射器 机构划定为1类致癌物，是一种毒性极强的 下，取下玻璃注射器柱塞，准确移取10．OraL 物质，在天然污染的食品中以黄曲霉毒素B． 混匀好的溶液到玻璃注射器中，接上柱塞，轻 最为多见，其毒性和致癌性也最强。作为啤 轻压柱塞，以约6mL／min流速缓慢通过免疫 酒生产企业，准确快速检测黄曲霉毒素有着 重要意义，确保每一批出厂成品合格，让消 清洗，再以lOmL去离子水清洗柱子两次，弃 费者放心是我们的责任。 去全部流出液，并使2mL～3mL空气通过柱 1材料与方法 体。准确加入1．OmL色谱级甲醇洗脱，流速 1．1主要试剂 甲醇、乙腈，色谱纯。氯化钠、氯化钾、 于玻璃试管中，供检测用。 磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、吐温-20、氢氧 1．4测定方法 化钠、盐酸，分析纯。黄曲霉毒素标准品(黄 色谱条件：流动相甲醇一水(45+ 曲霉毒素B，、B2、G，和G：) 收稿日期：2012—09—25 碘柱后衍生液，衍生溶液流速0．3mL／min， 万方数据 康迪，消毒专家 搠t0533．3178680、洲盯博真{3f78681 呻：／hw,．w．konay．mE删@163con- 反应管温度70。C，反应时间1分钟。色谱柱： 合标准工作液：分别准确移取1