拟南芥zyp1蛋白的原核表达多克隆抗体制备及细胞-应用科学学报.pdfVIP

Online system: 农 业 生 物 技 术 学 报 Journal of Agricultural Biotechnology 2015, 23(12): 1568~1575 DOI: 10.3969/j.issn. 1674-7968.2015.12.005 拟南芥ZYP 1蛋白的原核表达、多克隆抗体制备及细胞学行为分析 毋瑞华 杨妍 刘征 程征 田保明 位芳* 郑州大学生命科学学院郑州450001 *通讯作者，fangwei@ 摘 要 为分析联会复合体(synaptonemal complex, SC)相关蛋白ZYP 1 在植物减数分裂过程细胞学行 为，本研究通过克隆拟南芥(Arabidopsisthaliana) ZYP1基因片段，构建重组载体pET-28a(+)-ZYP1，优化大 肠杆菌(Escherichiacoli）诱导表达体系，将亲和层析纯化后的ZYP 1 融合蛋白，免疫新西兰大白兔 (Oryctolaguscuniculus) ，制备ZYP 1 蛋白的多克隆抗体，并通过Western blot 和酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay, ELISA)确定抗血清的特异性和效价。结果表明，成功构建的拟南 芥ZYP 1 原核表达载体，在大肠杆菌中以 1.0 mmol/L 异丙基- β- D- 硫代半乳糖苷(isopropyl- β- D- thiogalactoside, IPTG) ，37 ℃诱导表达4 h 后，融合蛋白得到高水平表达。所制备的多克隆抗体具有较高 的特异性和灵敏性，通过免疫荧光染色，能够检测或定位植物细胞内ZYP 1 蛋白抗原。同时，免疫荧光分 析结果表明，ZYP 1 蛋白在减数分裂前期过程的细线期开始出现，双线期逐步减少，到达终变期时几乎消 失，因此，ZYP 1 蛋白的动态变化与SC 的形成与解散一致，是调控减数分裂期同源染色体联会的重要组 成。研究结果有助于深入分析联会复合体相关蛋白ZYP 1在植物减数分裂过程中的生物学功能。 关键词 拟南芥，ZYP 1，亲和纯化，多克隆抗体，免疫荧光染色 Prokaryotic Expression, Polyclonal Antibody Preparation and Cytological Analysis of ZYP1 in Arabidopsisthaliana WU Rui-Hua YANG Yan LIU Zheng CHENG Zheng TIAN Bao-Ming WEI Fang* School of Life Sciences, Zhengzhou University, Zhengzhou 450001, China * Corresponding author, fangwei@ Abstract To analyze the cytological behavior of synaptonemal complex (SC) related protein ZYP 1 in plant meiosis, a recombinant vector pET28a- ZYP1 by cloning fragment of ZYP1 gene was constructed. The induction condition of the fusion protein expression in Escherichiacoli was optimized. Polyclonal antibody was produced by immuning New Zealand rabbits (Oryctolaguscuniculus) with the protein which was purified by Ni- NTA affinity chromatography. The specificity and titer of the purified polyclonal antibody was examined by