EGF对食管鳞癌细胞HIF-1α基因表达及功能的影响.pdfVIP

临床误诊误治2013年12月第26卷第 12期 ClinicalMisdiagnosisMistherapy，Vo1．26，No．12，December2013 ·93 · EGF对食管鳞癌细胞HIF—lot基因表达及功能的影响 潘 琦，施瑞华，朱 宏 ，凌亭生，郝 波 [摘要] 目的 研究表皮生长因子(EGF)对人食管鳞癌细胞株 HIF—lot基因表达及功能的影响及其对血管生成拟态相 关基因表达的影响。方法 将人食管鳞癌细胞株 Eca一109、TEl3分为试验组(加入含 EGF100 g／L的无血清 DMEM培养 液)和对照组(加入无血清 DMEM培养液)，分别于常氧及缺氧下培养。应用蛋 白质 印迹法 (Westernblot)检测细胞 HIF—lot 蛋白与血管内皮钙黏附素(sVE—cadhefin)、层黏连蛋 白(Laminin53,2)、酪氨酸蛋 白激酶受体(EphA2)和基质金属蛋 白酶一2 (MMP一2)基 因蛋白的表达 ，应用逆转录聚合酶链反应法 (RT．PCR)检测 HIF—lot与 sVE—cadherin、EphA2和 MMP一2RNA的表 达 ，基质胶 (Matrige1)三维培养显微镜下观察并计数两组细胞 的管状结构。结果 常氧和缺氧情况下，与对照组比较 ，试验组 Eca一109、TEl3细胞 HIF一1ot蛋 白与sVE—cadherin、Laminin5,32、EphA2基 因蛋 白的表达及 sVE—cadherin、EphA2RNA水平的表 达均显著增加，差异均有统计学意义(P0．05)；而对MMP一2基因蛋 白的表达及 RNA水平的表达无明显影响，差异无统计学 意义(P0．05)。Eca一109、TEl3细胞均可形成典型的管网状结构，试验组在 EGF作用下数 目增加，与对照组比较差异有统计 学意义(P0．05)。结论 在常氧和缺氧情况下 EGF均可促进 Eca一109、TEl3细胞 HIF—lot蛋白与 sVE—cadherin、EphA2等基 因蛋白及 RNA的表达，均可形成典型的管网状结构，且 EGF能有效促进肿瘤细胞体外血管生成拟态形成。 [关键词] 表皮生长因子；食管肿瘤 ； 乏诱导因子 ；基 因表达调控 [中国图书资料分类号] R735．1 [文献标志码] A [文章编号] 1002—3429(2013)12．0093—04 [DOI] 10．3969／j．issn．1002—3429．2013．12．035 EffectofEGF on theFunction andExpression ofHIF-loLinEsophagealSquamousCancerCells PANQi，SHIRui—Hua，ZHUHong，LINGTing—Sheng，HAOBo(DepartmentofGastroenterology，theFirstAffiliatedHospitalof NanjingMedicalUniversity，Nanjing210029，China) [Abstract] Objective Tostudytheeffectofepidermalgrowthfactor(EGF)onthegeneexpressionandfunctionofHIF一10【 in esophagussquamouscarcinomacellsandonrelatedgeneexpressionofangiogenesismimicry．M ethods Eca一109andTEl3cells weredividedintoEGFgroup (joinserum—freeDMEM culturesolutionwithEGF100 g／L)andcontrolgroup(joinselum—free DMEM culturesolution)，andthetwogroupswererespectivelyculturedundernormoxicandhypoxicconditions．Theexpressionsof HIF-lot，vascularendothelium cadherin (sVE—cadherin)，Laminin5,32，receptoroftyrosineproteinkinase(EphA2)andmatrix metalloproteinases一2(MMP-2)proteinweredetectedwithWesternblotting，andexpressionsofHIF-lo