人脑胶质瘤原代细胞培养及形态学观察.pdfVIP

中国神经精神疾病杂志 2010年 第36卷 箜 501 · 论 著 · 人脑胶质瘤原代细胞培养及形态学观察 檀艳丽 方川 王雷鸣 由江峰 刘书哲 钟延丰 【摘要】 目的 探讨人脑胶质瘤原代细胞培养的有效方法，建立理想的胶质瘤细胞体外试验模型。方法 采用组织块培养法 对22例人脑胶质瘤进行原代细胞培养，倒置显微镜下观察肿瘤细胞的形态学特点，通过 四甲基偶氮噻唑蓝(Mrrr)法绘制生长曲线， 研究体外培养细胞的生长情况。利用细胞免疫组织化学染色的方法检测胶质纤维酸性蛋 白(Glialfibrillaryacidicprotein，GFAP)及 Ki67的表达 ，鉴定培养的细胞 。结果 脑胶质瘤细胞原代培养2l例成功，1例失败 ；培养成功的细胞贴壁生长，形态各异，生长状态 好，有明显的对数生长期，并可传代培养。各级别原代培养细胞吸光度值差异有统计学意义 (P0．05)，恶性程度越高，细胞增殖越 快 。细胞 GFAP表达阳性，证明培养的细胞为胶质瘤细胞。结论 组织块培养法适合于体外胶质瘤细胞原代培养，通过此方法可以 建立理想的胶质瘤细胞体外试验模型。 【关键词】 胶质瘤 原代培养 形态学 免疫组化 【中图分类号】 R739．41 【文献标识码】 A 人脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的一组肿瘤 。原代培养 初期组织块周同原代胶质瘤细胞与传代后细胞生长情况 、形态学 的脑胶质瘤细胞保留原来的遗传特性，最接近和反映体内生长特 特点并进行拍照。 性，是理想的基因表达和药物毒性体外试验模型。本研究采用组 1．4 免疫组织化学染色鉴定细胞性质 取对数生长期的细胞悬 织块培养法进行人脑胶质瘤原代细胞培养并观察其形态，探讨人 液滴加在多聚赖氨酸处理的无菌载玻片上 ，待细胞爬满载玻片 脑胶质瘤原代细胞培养的有效方法。 后 ，细胞经冷丙酮固定 15min，采用细胞免疫组织化学 sP法对培 养细胞加 以鉴定，一抗分别为鼠抗人 GFAP单克隆抗体和 Ki67 1 资料与方法 单克隆抗体 (试剂购 自福州迈新生物有限公司)。GFAP以胞浆 1．1 临床资料 2009年4～9月收集河北大学 附属医院神经外 呈棕黄色为阳性细胞。Ki-67以细胞核呈棕黄或棕褐色为阳性细 科22例胶质瘤患者 (所有病例均经病理学证实且术前 、术中均未 胞 ，在高倍镜 (400X)下随机选取 10个视野 ，计数约 1000个肿瘤 使用化疗药物)手术切除的新鲜标本，所有胶质瘤标本征得患者 细胞计算阳性肿瘤细胞所 占的百分率。 或家属的知情 同意，并取得河北大学 附属医院伦理学委员会批 1．5 MTT比色法绘制生长 曲线 原代胶质瘤细胞调整细胞悬 准。其 中男9例，女 13例 ，年龄 8～76岁 ，平均年龄44．5岁。按 液浓度为 10 个 ／mL，200 L／孔接种于96孔板，每组细胞接种 6 照WHO(2007)中枢神经系统肿瘤分类标准…：星形细胞瘤9例 个孔 ，每隔24h监测一组 ，连续检测7d。酶联免疫检测仪存570 (Ⅱ级)，间变性星形细胞瘤 l0例(Ⅲ级)，胶质母细胞瘤 3例(Ⅳ nm波长处测定光吸收值(OD值)，OD值 以均值 ±标准差(±s) 级)。 表示 ，以时间为横坐标 ，6孔平均 OD值为纵坐标 ，绘制细胞生长 1．2 组织块法进行人脑胶质瘤细胞原代培养 手术切除的新鲜 曲线。读取各例第4dOD值，检测细胞增殖活力，分析与病理级 肿瘤标本，立即放人无菌DMEM培养液中常温送实验室。肿瘤 别的关系 ，检测重复 3次。 组织用含有青霉素 、链霉素的DMEM培养液冲洗3次，放入无菌 1．6 统计学分