专08体液蛋白质检验.pptVIP

* 评价： 优点：简便，准确，重复性好，10g-120g/L线性好，特异性与精密度好，批内CV%＜2%，显色稳定。 缺点：灵敏度较差，对蛋白质含量低的体液标本不适合。 应用：常规推荐方法。手工或上机使用。 * 3.酚试剂法 原理： 蛋白质分子中的酪氨酸残基和色氨酸残基能够和酚试剂中的磷钨酸-磷钼酸反应生成蓝色化合物， Lowry改良法：在酚试剂中加入Cu2+（75%呈色），提高了呈色的灵敏度，为双缩脲法的100倍左右。 Folin 1921 年首创，利用蛋白质分子中酪氨酸和色氨酸残基（酚基）还原酚试剂（磷钨酸-磷钼酸）起蓝色反应。1951 年，Lowry 对此法进行了改进，先于标本中加碱性铜试剂，再与酚试剂反应，提高了灵敏度。 * 评价及应用： 优点：操作简单，改良法灵敏度高（10μg-60μg），适合测定蛋白含量少的标本。 缺点：各种蛋白质酪氨酸和色氨酸比例不同，只适合测定单一蛋白质。受一些药物干扰。 * 4.比浊法 原理： 评价及应用： 优点：简便不需特殊仪器。 缺点：浊度形成的干扰因素多（加试剂方法，反应温度，蛋白絮状沉淀等） 某些酸类（磺基水杨酸等）和血清蛋白质结合产生沉淀，测其浊度，与标准对比，可求蛋白含量。 * 5.染料结合法 在酸性环境下，带正电的蛋白质（-NH3+)与染料的阴离子产生颜色反应，使染料的吸收峰改变，可既而用分光光度法比色测定。 原理： 常用染料：氨基黑，考马斯亮蓝等 评价及应用： 优点：操作简便，重复性好，灵敏度高，且干扰因素少。 缺点：特异性不高；不同蛋白质和染料的结合力不一致，标准物不易确定。 * 6.紫外分光光度法 蛋白质分子中的酪氨酸和色氨酸等芳香族氨基酸可使蛋白质溶液在280nm处有一吸收峰。可用于测定蛋白质但需避免核酸干扰。 （1）Lowry-Kalcker 公式 蛋白质浓度（mg/ml）=1.45 A 280 - 0.74 A 260 （2）Warburg-Christian 公式 蛋白质浓度（mg/ml）=1.55 A 280 - 0.76 A 260 原理： * 评价及应用： 优点：敏感而简便，可保留蛋白生物活性，常用与较纯的酶和免疫球蛋白。需紫外分光光度计及石英比色皿。 缺点：各种蛋白质中芳香族氨基酸含量和比例不同；在280nm测定易受游离色aa和酪aa以及尿酸和胆红素的干扰；导致准确性和特异性受影响。 措施：在220-225nm波长区域，用0.15mol/l的NaCl稀释1000-2000倍可消除干扰。 * 7.折光测定法 溶解在溶液中的固体可增加溶液的光折射率，在固定波长和温度下，光折射率和血清中蛋白质含量成正比。 原理： 评价及应用： 优点：简便、快速，易掌握，重复性较好，适合临床急诊，体检筛查和胸腹水蛋白质测定。 缺点：准确性较差，易受高血脂症，高胆红素血症以及溶血等因素影响，会由于A/G比值变化而产生误差。 * 参考范围：成人60－80g/L 临床意义： 总蛋白升高： 总蛋白降低：①丢失过多 ②消耗增加 ③白蛋白合成减少 ④水肿 真性升高：多发性骨髓瘤(MM)、巨球蛋白血症、 自身免疫性疾病等 假性升高：机体明显失水，总蛋白含量相对升高， A/G几乎不变 * （二）血清白蛋白测定 方法： 1.染料结合法( 推荐) 　2.盐析法 3.电泳法　　　　　　　4.免疫化学法 * 1.染料结合法( 推荐) 原理: 血清ALB可通过离子键或疏水键与包括染料在内的各种有机离子结合,而GLB很少结合外源性染料,可在不分离ALB与GLB的情况下直接测定ALB。 染料 BCG BCP 优点 缺点 易于和非人源性白蛋白结合 与白蛋白结合特异性较差 与非人源性白蛋白结合力弱 与白蛋白结合特异性好 在30秒内测可提高特异性 BCG:溴甲酚绿，BCP：溴甲酚紫 * 应用及评价: 严格控制反应时间的BCG法既适合手工也适合自动 化分析。临床上推荐使用。 * 原理: 盐析是由于加入大量的中性盐破坏了蛋白质的水化膜、中和其所带的电荷从而使蛋白质分子聚集而沉淀析出。 各种蛋白质的亲水性和带电荷不同，故盐析时所需盐浓度与pH不同。GLB在生理pH下带电荷及水化膜比ALB少，可被较低浓度中性盐沉淀。 2.盐析法 中性盐：硫酸铵、硫酸钠等 *