利用泰勒分析和动态涂层毛细管电泳系统快速测定蛋白质的扩散系数.pdfVIP

V01．28 高等学校纯学学报 No．10 2007年lO月 CHEMICALOFCHINESEUNINERSITIKS JOURNAL 1875一1877 [研究快报】 利用泰勒分析和动态涂层毛细管电泳系统 快速测定蛋白质的扩散系数 左敏1一，陈义1 (1．中国科学院化学研究所生命分析化学实验室，北京100080；2．中国科学院研究生院，北京100039) 关键词微量鬣自质；扩散系数；毛细篱电泳；泰勒分析 中阉分类号0657 文献标识弼A 文章编号0251-0790l2007)10．1875-03 扩散系数(Diffusioncoefficient，D)是生物分子的一个重要的物化参数，可用来表征溶质分子程溶 液中的特性．扩散系数除了能反映分子尺寸或溶液粘度等参数外，更能反映分子形状及分子间相互作 焉的楣关信意H】．迄今为盎，已有多种测定蛋蛊震扩散系数的方法，包括核磁共振、动态光散麓及泰 勒分散等注’，其中泰勒分散理论及其扩散系数测定方法∞’43具有广阔的发展前途． 本文以泰勒分散理论为基础，首次采用动态涂层毛细管来准确和快速测定蛋白质分子的扩散系 数。 1实验部分 1．1试剂与仪器聚二烯丙基二甲基氯化铵[Poly(diallyldimethylammonium 量400000-500000】、溶蔻酶(Lysozyme)、细胞色素c(CytochromeC)和核糖核酸酶盍(RNase焘)均为 Sigma公司产品．察验用水均为三次蒸馏水． 所有实验均在P／ACE MDQ(美国Beckman公司)电泳仪上进行．石英毛细管尺寸为60cm(有效长 度50 ． cm)×75弘激i。d．(涎j|：永年光纤厂)。 1．2实验过程扩散系数的实验操作类似于无电压毛细管电泳：样黯由压力(3．32kPa)引入毛细管， 进样时间为5s；然后在19．98kPa压力下将样品推过毛细管，使之经过检测窗髓，在214nm下测得紫 终光谱吸收峰，峰觞采集额攀秀4Hz；最后对蜂参数进行分析，获得扩散系数。测定时亳细管恒温于 20℃． mol／L 第一次测定前，毛细管需先依次用0．1 NaOH冲洗5min，水冲洗5min，用质量体积分数为 10％的PDDAC冲洗10min，最后用水冲洗5min以除去多余的涂层荆．每两次遴样之闯，毛细管需依 rain． 次用质量体积分数为10％的PDDAC和水各冲洗10和5 1。3毛纽管内径测定毛细管内径(2Ro)是扩散系数测定的关键参数，操作需要严格。本文依据 Hagen-Poiseuille定律[式1)】来测定： R。=448￡叼Q／仃(△p)=4v／8L叩lo／7r(Ap)gdz5t(1) 式(1)申，￡是毛缨管的总长度；g是重力加速度；口是水的体积流量；九耨霉分别是25℃下水的密度 (O．9970 cP)． g／mL)和粘度(O。8909 测定的具体过程是：在25℃时以～定的压力差△p(67．33，100．66和135．43 kPa)让蒸馏水流过 毛细管，收集20 min内流出懿承并称重(G)；截取￡=60cm、标识霆。=75Ixm的毛缨管，安装到毛缨 管电泳仪串，恒温下按要求测定流过的蒸馏水重量，将所褥数据代入式(1)，计算得到亳细管的平均 收稿暇期：2007-05-21． 基金袋弱：燕家蜜然辩学基金擞壤号槲技郝蔟金(撵准琴：2002CB713803)资韵。 联系人简介：陈义．男，博士，研究员，博士嫩导师，主要从事毛细管电泳和表面等离子体共振研究