免疫检测技术课件.ppt

已知抗原加入血清（检测抗体） 加入标准量补体 加入包被抗体的红细胞 检测红细胞溶解情况 Ag Patient’s serum Ab No Ab Ag 三、补体结合实验 （2个系统，5种成分） 免疫标记技术是采用酶、荧光素、放射性核素等标记物标记抗原或抗体所进行的抗原抗体反应。 免疫标记技术既可对样品作定性、定量检测，也可进行定位分析，且大大提高了方法的灵敏度，是目前应用最广泛的免疫学检测技术。 四、免疫标记技术 常见标记免疫技术 放射免疫技术 酶免疫技术 荧光免疫技术 四、免疫标记技术 该法是用放射性核素作为标记物标记抗原或抗体 所进行的抗原抗体反应，尽管放射免疫技术需特殊 仪器设备且有一定的放射性危害，但由于其具有高 度的灵敏度（pg）和自动化检测等特点，因此在实 验研究和临床检测中仍被广泛应用。 主要用于激素、小分子药物、肿瘤标志物等 小分子化合物的定量分析。 1. 放射免疫技术（125I） 放射免疫分析－基本原理 竞争性结合反应的经 典标记抗原（Ag*）和 非标记抗原（Ag）与限 量抗体(Ab)竞争性结合 Ag*和Ag具有等同的 与Ab结合能力 Ag* Ab Ag 标记抗原 特异性抗体 待测抗原 ( Ag*-Ab)+ (Ag-Ab) 抗原抗体复合物 分离Ag*-Ab 和游离Ag* 从标准曲线上读知含量 测定Ag*-Ab和游离Ag*放射性 放射免疫测定法(RIA)示意图 RIA法原理及标准曲线 75 50 30 10 0 1 10 100 1000 未标记抗原浓度（ng/mL) 结合/未结合的放射活性（%） Ag*-Ab Ag* 将荧光素（异硫氰酸荧光素或罗丹明等）标记抗体， 制成荧光抗体诊断试剂。 用荧光显微镜观察荧光的产生或荧光强度，以此判断 抗原的存在、定位和分布情况。 免疫荧光技术有直接法和间接法等。 2. 免疫荧光技术 免疫荧光技术——直接法 Ag 荧光素标记的 特异性抗体 组织切片 免疫荧光技术——间接法 Ag 荧光素标记 的抗抗体 组织切片 待测抗体 免 疫 荧 光 染 色 显 示 细 胞 骨 架 免疫荧光染色是利用抗原－抗体特异性结合的原理，用经荧光染料标记的抗体对细胞或组织内的蛋白质进行定性或定量研究的方法。该技术与荧光显微镜观察相结合，可对特定的蛋白质进行细胞或组织内的精确定位。 常用于抗原、抗体标记的荧光染料有以下几种 显示绿色荧光：Fluorescein isothocyancie(FITC),Alexa-488 显示红色荧光：Rhodamine B, Texas Red, Alexa-546,568,594 显示蓝色荧光：Alexa－350 用Alexa488标记的抗人α-tubulin抗体染色显示微管(绿色); 细胞核: 红色, DAPI染色 人皮肤角化细胞免疫荧光染色 用抗α-tubulin抗体染色显示微管(绿色); 细胞核: 红色, DAPI染色(激光共聚焦显微镜照片) PtK1细胞免疫荧光染色 本法是抗原抗体反应的特异性与酶对底物的高效催 化活性相结合的免疫检测技术。酶标记的抗原或抗 体与待检标本中的相应成分特异性结合，根据酶作 用底物后的颜色变化，采用肉眼或酶标检测仪分 析、判断结果。 常用方法有酶联免疫吸附试验和酶免疫组化法，前 者用于检测可溶性抗原或抗体，后者常用于检测组 织中或细胞表面的抗原。 3. 免疫酶测定法 是在固相载体（通常为聚苯乙烯反应板）表面进行 的抗原抗体反应。 实验中常用的酶是辣根过氧化物酶（HRP），底物 为二苯基联苯胺。 酶联免疫吸附试验（ELISA）： ELISA试验三个必要的试剂 (1)固相的抗原或抗体（免疫吸附剂） (2)酶标记的抗原或抗体（标记物） (3)酶作用的底物（显色剂） 第九章 免疫检测技术 免疫检测是目前生物学检测方法中用途最广泛的一种方法。 具有高度精确、灵敏、特异的特点。 可用于免疫学的基础理论和应用研究，也可应用于生物学研究的各个领域。 1 、免疫疾病诊断 2 、动物植物生理活动研究（激素、维生素） 3 、物种及微生物鉴定 4 、动物、植物性状的免疫标记 5 、免疫增强药物和疫苗的研究 6 、发病机理研究 7 、分子生物学研究 免疫检测技术在生物科学领域中的应用： 第一节 抗原抗体反应原理 抗体能特异性地识别相应的抗原，并与之结合。这种 结合在体外也能发生，当抗原和抗体在体外特异性结合后 可出现肉眼可见或借助仪器可检测出的反应现象。 试验时既可用已