开发和商业化生产中生物药物生产工艺与变更.pptxVIP

开发和商业化生产中生物药物生产工艺的变更 REMICADE的历史 引言 工艺周期 临床前工艺开发——工艺放大——临床试验——批准商业化生产工艺。 工艺变更的原因 进一步放大、改进 转移到新的或附加生产地点 必须证明变更后生产的药品能够确保患者服用药品的安全性和有效性与临床试验中所使用的药品及许可证批准的药品相同。 原因：设备和原材料可用性的变化、放大生产的需要、技术转让、工艺改进以及监管要求。 Infliximab的结构、功能和制剂 商品名REMICADE是第一个正式获准用于人体的肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α,TNF-α）抑制剂类药物。批准用于类风湿关节炎、克罗恩病、强直性脊柱炎和银屑病关节炎等自制免疫性疾病的治疗。 INFLIXIMAB的原料药是一种纯化的重组DNA来源的嵌合人-鼠IgG单克隆抗体，可高亲和性（Ka=1 × 1010L/mol）结合并中和人TNF-α。 原料药的生产采用经编码H和L链的表达质粒转染的重组鼠骨髓瘤细胞系。 Infliximab结构 人IgG1 小鼠TNG-α结合位点 Infliximab生产工艺概述 预培养﹠扩增 连续灌注生产 ProA捕获﹠超滤 S/D处理 阳离子交换 Viresolve过滤和超滤 初次阴离子交换 二次阴离子交换 PFB制备（浓缩﹠渗滤） 培养基制备 缓冲液制备 融化﹠混合DPC洗脱物 I期 II期 III期 BLS准备 审查﹠批准 临床开发 细胞系 生物反应器 纯化 制剂 生产批次 新细胞系 不含血清 较少步骤 液体 培养基/时间 时间 8× 4× 冻干 2 5 3 5 确立产品可比性可能使用的分析测试方法 蛋白质 聚集体 活性 A280 SEC-HPLC 体内生物活性测定 A280/A260 免疫印迹 细胞生物活性测定 SDS(CB) 分析超速离心 放射免疫测定 SDS(银染) 光散射 ELISA 免疫印迹 可见颗粒 一般性质 肽谱法 显微镜下可见颗粒 pH 胰蛋白酶 糖 外观 Lys-C 唾液酸 辅料 反相HPLC 中性糖含量 生物负荷/无菌 N-端测序 N-连接寡糖 纯度 等电聚焦 等电聚焦 SDS C-端测序 单糖 内毒素 氨基酸组成 毛细管电泳 生物负荷 圆二色谱 N-羟乙酰神经氨酸（NGNA） 宿主DNA 甲硫氨酸氧化 宿主细胞蛋白质 脱酰胺作用 溶出物 荧光色谱 质谱 工艺变更——DPC范例 澄清 收集液 0.45μm 过滤 Pro-A 超滤 浓缩 0.22μm 过滤 冷冻 洗脱液 DPC改进本质是线性放大 色谱放大工艺参数 树脂性能、线性流速、载荷比、原料组成、柱填充、床层高度。 超滤浓缩放大工艺参数 维持操作参数：膜类型、标示孔径、流体几何学、通道高度和长度。 流体力学参数：单位膜面积的料液和滤出液体积、通量率、浓缩因子。 通过膜面积加倍以适应柱体积1.8倍增加，实现规模放大。 验证工作 较大规模层析柱的安装验证（Installation Qualification,IQ）； 较大UF系统的IQ； DPC运行的5项验证，在此期间进行所有的常规中间过程检验和附加杂质检验。 较大层析柱的3次清洁验证； 对受影响的批次进行附加稳定性测试。 申报资料的信息 变更说明； 变更目的； 已完成的验证工作摘要； 较大规模的5次连续DPC运行的中间过程检验结果； 变更前后杂质清除率的可比性； 变更前后层析图形的可比性； PFB（含有从最初5次生产规模的DPC运行中获得的原料）的批放行数据。 已完成的新REMICADE生产设备的选择性工艺变更 工艺步骤 莱登工艺 马尔文工艺 变更原因 预培养和扩增 每批采用工作细胞库（WCB）中的一瓶 每批采用多个WCB瓶 需要额外的WCB瓶来增加细胞数量，支持生物反应器放大，而不需额外传代 连续灌注培养 1、采用50L灌注种子细胞反应器 2、采用500L灌注生物反应器 3、内在自旋过滤器用于细胞截留 4、上清液澄清后，贮存于8-14℃ 1、采用100L灌注种子细胞反应器 2、采用1000L灌注生物反应器 3、外部自旋过滤器用于细胞截留 4、上清液不澄清，贮存于2-8℃ 1、体积直接放大2倍 2、体积直接放大2倍 3、过滤器表面积直接放大2倍 4、生产地点差异性由附加工艺验证支持 Pro-A捕获 采用规格相同蛋白A柱（14CM柱高） 采用两种不同规格的蛋白A柱（8和14CM高度） 新生产地点操作规程由附加工艺验证支持 工艺步骤 莱登工艺 马尔文工艺 变更原因 DPC洗脱液的融化和混合 4×批量大小 8×批量大小 直接放大2倍 S/D处理及阳离子交换 D100层析柱 （12CM柱高） D140层析柱（柱高相同） 直接放大2倍 Viresolve过滤和超滤 分两部分进行批量处理：病毒过滤（1×膜面积），超滤（