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实验二 粪便标本中肠道致病菌的分离培养与鉴定实验目的 了解肠道中致病菌分离培养与鉴定的方法 认识肠道杆菌的主要生化反应特点 材料 粪便标本1标本来源与特征：病人持续高热39℃,肝脾肿大，皮肤有玫瑰疹，外周白细胞减少 大肠埃希菌不同的致泻性大肠埃希菌引起的中毒，症状各不相同。①产肠毒素性大肠埃希菌引起的中毒主要症状是水样腹泻、腹痛、恶心、低热。每天腹泻可达8～12次。②肠道侵袭性大肠埃希菌的中毒症状与志贺菌引起的痢疾相似，发热、剧烈腹痛、水样腹泻、粪便中有少量粘液和血。③肠道致病性大肠埃希菌引起的中毒主要症状是发热、不适、呕吐、腹泻、粪便中有大量粘液但无血，有约20%患者由呼吸道症状，感染的症状通常比较严重。④肠集聚性黏附性大肠埃希菌引起的中毒症状成年人表现为中度腹泻，病程1～2天。婴幼儿多表现为2周以上的持续性腹泻。⑤肠出血性大肠埃希菌引起的中毒，一般3～10天发病，常有突发性的腹部痉挛，有时类似于阑尾炎的疼痛。有的病人只有轻度腹泻；有些病人由水样便，转为血性腹泻，腹泻次数有时可达10多次，低热或不发热；许多病人同时有呼吸道症状。可发展为溶血性尿毒综合征和血栓性血小板减少性紫癜等多器官损害。老人和儿童患者死亡率很高。 沙门氏菌肠炎沙门氏菌引起多数起病急骤/search?word=%E7%95%8F%E5%AF%92fr=qb_search_expie=utf8畏寒发热体温一般38～39℃伴有恶心呕吐腹痛腹泻大便每日3～5次至数十次不等大便常为水样量多很少或没有粪质可有少量粘液有恶臭偶可呈粘液/search?word=%E8%84%93%E8%A1%80%E4%BE%BFfr=qb_search_expie=utf8脓血便本型病程一般2～4天偶有长达1～2周。类/search?word=%E4%BC%A4%E5%AF%92fr=qb_search_expie=utf8伤寒型。败血症型。局部化脓感染型等。由查询资料及标本特征，可初步判断为大肠埃希菌、志贺菌和伤寒沙门菌 实验方法1、标本采集2、分离培养与鉴定 增菌培养（必要时） 粪便标本 选择鉴别培养基 可疑菌落 克氏双糖铁培养基 （伊红美兰或SS琼脂平板等） 生化鉴定和动力检查 血清鉴定 革兰染色镜检（必要时） 枸橼酸盐利用硫化氢试验尿素试验半固体培养基葡萄糖试验甘露醇试验乳糖试验吲哚试验甲基红试验VP试验 肠道杆菌的生物学特性性状菌种形态颜色伊红美兰琼脂平板上SS琼脂平板上半固体双糖铁培养基乳糖H2S葡萄糖动力大肠埃希菌杆状G-菌菌落较大，不透明，呈深紫色，并带金属光泽菌落较大，不透明，呈红色 +— ⊕+伤寒沙门菌杆状或多形性G-菌菌落较小半透明，无色菌落较小半透明，无色或淡黄色—+/— ++痢疾志贺氏菌杆状G-菌菌落较小半透明，无色菌落较小半透明，无色或淡黄色——+— 肠道杆菌的生化反应和动力葡萄糖甘露醇乳糖吲哚甲基红VP枸橼酸盐利用H2S尿酸分解动力大肠埃希菌⊕⊕⊕++————+伤寒沙门菌++——+——/+—/+—+痢疾杆菌++——/++—————SS琼脂培养基：沙门氏菌，志贺菌形成无色或带黑色的菌落，大肠埃希菌形成红色菌落。双糖铁（KIA）培养基：大肠埃希菌分解乳糖，并产生H2S反应，葡萄糖分解产酸产气，动力呈阳性;伤寒沙门杆菌不分解乳糖，大多数产生H2S反应，葡萄糖分解产酸，动力呈阳性；痢疾志贺菌不分解乳糖，不发生H2S反应，葡萄糖分解产酸，动力呈阴性。 主要沙门菌抗原结构表群菌名O抗原H抗原第一相第二相A甲型副伤寒1.2.12a1.2B乙型副伤寒2b1.2鼠伤寒杆菌2i1.2C丙型副伤寒6.7.Vic1.5猪霍乱杆菌6.7c1.5D伤寒杆菌9.12.Vid-------肠炎杆菌1.9.12g.m-------E鸭沙门氏菌3.10e.h1.6 记录全部试验结果，得出结论检材（标本号）SS平板KIA革兰染色生化反应血清学鉴定结论葡乳甘IMVP硫化氢动力尿素 结果预测1、生化反应结果显示，疑为伤寒沙门菌，再用A-F群沙门氏菌多价O血清作玻片凝集试验，呈阳性者为伤寒沙门氏菌。2、生化反应结果显示，疑为志贺菌，则取菌苔与志贺菌多价诊断血清做玻片凝集试验，呈阳性者为志贺菌。3、生化反应结果显示，疑为大肠埃希菌，则取菌苔与志贺菌多价诊断血清做玻片凝集试验，呈阳性者为大肠埃希菌。 谢谢大家！⊕