遗传病的分析4基因组DNA提取和PCR扩增技术.pptVIP

遗传病的分析4基因组DNA提取与PCR扩增技术 一、基因组DNA提取 实验目的 基因组DNA的制备是基因分析的前提。 本实验要求掌握基因组DNA提取的基本方法。 原 理 DNA在生物体内是与蛋白质形成复合物的形式存在的。核酸与蛋白质之间的结合力包括离子键、氢键、范德华力等，破坏或降低这些结合力就可把核酸与蛋白分开。 DNA、RNA所含有的嘌呤环和嘧啶环的共轭双键具有吸收紫外光的性质，吸收高峰在260nm处，所以，可用紫外分光光度法测定DNA的浓度。 原理 基因组DNA提取试剂盒：在高盐的状态下，DNA纯化树脂专一性地吸附DNA；而在低盐或水溶液状态下，DNA被洗脱下来。 器材与试剂 台式高速离心机、天平、水浴恒温箱、移液枪、塑料离心管等 试剂盒（纯化树脂、GN结合液、漂洗液、无水乙醇、离心纯化柱 ）、TE缓冲液 操作 1、将全血轻轻混匀，转移0.5ml全血到1ml纯化树脂中，颠倒混匀5-6次，室温，3min。其间要颠倒混匀1次，5000r/min离心×3sec； 2、取沉淀，加1mlGN结合液悬浮沉淀，颠倒混匀， 5000r/min离心×3sec； 3、取沉淀，加0.5ml漂洗液纯化树脂2次，颠倒混匀， 5000r/min离心×3ecs；