利用新型一次性激流灌注式生物反应器培养动物细胞-惠博士.pdfVIP

第 11 卷第6 期 过 程 工 程 学 报 Vol.11 No.6 2011 年 12 月 The Chinese Journal of Process Engineering Dec. 2011 利用新型一次性激流灌注式生物反应器培养动物细胞 1 2 2 1 2 1 谢 波 ， 李峦峰 ， 杜春玲 ， 郝素娟 ， 吴书音 ， 惠觅宙 (1. 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室，北京 100190 ；2. 杭州安普生物工程有限公司，浙江 杭州 310019) 摘 要：利用新型一次性培养袋在 5∼10 L 激流灌注式生物反应器中培养 3 种贴壁和 3 种悬浮细胞，通过在线控制培 养温度、pH 值和溶氧等工艺参数，监测并分析培养过程中细胞密度、活率、糖耗等的变化情况. 结果表明，贴壁培 6 7 7 −1 养细胞 MDCK, VERO 和 DF-1 培养 6 d 后消化计数，密度分别达 4.8×10 ,1.0×10 和 1.5×10 mL ，细胞状态良好，活 率在 90% 以上. 悬浮细胞 CHO, BHK-21 和 Sf9 经无血清悬浮驯化后，经种子链扩增，在激流式反应器中悬浮培养的 6 6 6 −1 7 7 初始接种密度分别为 2.0×10 , 2.1×10 和 2.15×10 mL 时，培养一段时间后其最高培养密度分别可达2.0×10 , 2.1×10 7 −1 和 1.8×10 mL ，维持培养时间分别为 13, 12 和 10 d. 关键词：动物细胞；培养；贴壁；悬浮；一次性培养袋；激流灌注式生物反应器 中图分类号：TU834.82 文献标识码：A 文章编号：1009−606X(2011)06−1050−05 1 前 言 部分也可单独进行悬浮细胞的培养. 动物细胞大规模培养在生物制药领域发挥着越来 越重要的作用[1−3]. 动物细胞大规模培养和表达对生产 疫苗、抗体类蛋白质药物有明显的优势，一方面活性高、 稳定性好，是最重要的表达系统，占生物技术药物生产 方式的 70% 以上，市场份额超过65%，能保证产物中二 硫键多、翻译后修饰等复杂结构蛋白的活性；另一方面 效率高、成本低，能提升生物技术药物的创新能力和竞 争力，将是现代生物技术药物研发和生产的主流方向. 但动物细胞大规模培养生产生物药物还存在一定 图 1 激流灌注式生物反应器工作原理 [4−6] ，培养密度和产物浓度较低，在技术和设备上 Fig.1 Schematic illustration of the perfusion–current 问题 bioreactor system 远没有原核细胞培养成熟. 目前用于动物细胞培养的生 物反应器有很多种，但各具优缺点[7] ，如常见的搅拌式 本研究拟用一次性培养袋在激流灌注式生物反应 生物反应器，虽然混合传气效果较好、细胞培养密度高， 器中分别进行 3 种贴壁细胞 MDCK, VERO 和 DF-1(常 但高的剪切力产生大量的细胞碎片影响产物质量，而且 用于培养病毒生产疫苗[12−14])及 3 种悬浮细胞 CHO, 给分离带来一定困难[8] ；中空纤维式和气升式生物反应