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生物测定分析方法如何进行验证 验证 验证就是证明采用的方法适合于相应检测要求，具有相当的准确性和可靠性，进而可以达到控制产品质量的目的。 生物制品检测方法 生物制品质控中采用的方法包括理化分析方法和生物学测定方法。 生物制品的理化分析方法验证原则与化学药品相同. 本课件仅对生物测定方法验证进行讨论 生物测定方法 生物学测定系指采用生物学方法，以反映被测物的生物学特性为目的的测定方法。 常见的生物学测定方法: 酶反应试验 结合试验 细胞测定试验 动物试验 生物测定方法 酶反应试验 是指在体外能促进酶分子的活化或本身具备酶的活性，通过底物的变化检测酶活性。 这类方法的变异相对较小，结果比较准确。 试验结果的变化范围一般在5~20%之间。 生物测定方法 细胞测定试验 是指产品可以诱导细胞产生可测定的应答，如细胞增殖、聚集、分化、死亡、迁移或产生特定的化学物质等。 细胞测定试验一般能较好地反映制品的生物学活性，常用于各种生物制品的活性（效力）测定。 相对而言,方法的变异较大。与使用传代细胞相比，使用原代细胞的方法变异更大。 通常细胞测定的结果变化在50%以上。（30%） *精心操作以保证试验结果的一致性 生物测定方法 动物试验 是指以整体动物为试验材料检测制品生物学活性（或效力）的试验方法。 由于动物实验的成本高、周期长和变异大，所以一般仅用于成品检定。 更复杂并且包括动物的饲养、管理和维护。 一般测定一个药物的生物活性是通过与已知的标准品或未处理（未免疫）的动物进行比较而得。 方法的变异一般相对较大 ,通常动物试验的测定结果变化在50%以上。 生物测定方法特性 生物学测定方法可广泛用于各种检测目的，包括鉴别、生物活性和杂质检测等，其中最主要的是生物活性（或效价、效力）测定。 更大的可变性 使用的动物和细菌的多样性 测定的要求和标准更为宽松 生物测定方法来源 标准方法 (法定方法) 非标准方法(非法定方法,内控方法) 原则上，对于各类方法均需进行验证，但依方法来源的不同对于验证的要求有所不同。 生物测定法验证内容 生物测定方法验证内容.doc 耐受性验证项目 ， 由于生物测定的持续性、复杂性以及参考品与样品贮存时间较长的特点 ,可能需要考虑： 试验顺序的影响：测定在一个较复杂的试验中，由于它们相对于对照品的测定时间不同,测定顺序对试验参数的影响 。 冻融稳定性的影响：将样品反复冻融，以确定对检测结果的影响。 批间的精密性：测定不同批细胞、血清、或其他具有较高变动性的物质对测定方法的影响。 生物测定法验证 目前我们的成品分析方法均为法定方法. 在被确定为法定方法前已经过了适当的验证 。 企业使用前需进行转移性验证,以证实在企业实验室条件与实际的使用条件下该方法也是适用的。 方法转移验证的内容 EU要求：至少是系统适应性、专属性（目前有增加内容和项目的趋势）。 FDA要求：系统适应性、专属性、定量限、检测限、中间精密度。 中国：不知道？ 专属性、精密度 专属性如何验证 生物学测定方法的专属性与测定方法及产品组成密切相关，所以应首先从测试原理、测试用材料和供试品组成等方面分析方法的专属性 。 CHO细胞残留，采用ELISA法，确认抗体的特异性及目标蛋白的非干扰性。 如何进行？ 采用CHO蛋白标准品作为样品测试。（标准品浓度应选择质量标准限度左右的浓度）阳性结果 选用产品（目标蛋白）作为样品测试。（浓度应选择日常测试中的最大浓度，即范围的上限）阴性结果 用产品加CHO蛋白标准品测试。应阳性结果。 应有重现性，至少3个测试结果。 专属性如何验证 SDS电泳纯度 检测目的，目标蛋白的纯度 验证方法： 采用37度或更高温度将产品降解，获得产品二聚体杂质 与未降解的产品同时做实验，对照，降解后产品检测结果明显出现杂质带。 此外，需考虑产品中可能存在的小分子蛋白杂质。 应有重现性，至少3次检测结果 中间精密度如何验证 步骤：准备3个不同稀释度的样品（测量范围内的高、中、低浓度） 在一组3次试验中对每个稀释度重复测定3次。 测定不同工作日之间的变化 测定不同批号的试验样品间的变化 测定不同实验员间的变化等等 计算每一试验每一浓度测定的平均值和标准偏差 计算试验间每一浓度的变异系数 * * URS-用户需求标准 是企业（需求方）根据用途、控制目标方法和要求对设备、公用工程等设施提出的各项标准，如材质、结构、电源电气、配件等。是供方设计制造设备的依据和标准之一。 FDS-工厂设计标准 根据需求方的URS,结合加工机械与工艺,对设备进行设计制造的标准. DQ- 设计确认 根据URS对设备的设计工艺、尺寸、制造流程、参数