(生物制药工艺学)第九章亲和纯化技术.ppt

* （一）、金属螯合亲和层析 将环氧活化型Sepharose 6B与金属螯合剂偶联，再用金属离子溶液处理制成金属螯合亲和层析柱。 金属螯合剂:亚氨二醋酸、氨基水杨酸、8-羟基喹啉、羧甲基氨基酸等 . * 蛋白质上的氨基酸残基，如组氨酸的咪唑基、半胱氨酸的巯基和色氨酸的吲哚基，利于蛋白质与固定化金属离子结合。 金属离子如锌和铜。 * 吸附：pH在6~8。 洗脱：降低pH值、增加离子强度、或在缓冲液中加5mmol/L EDTA等方法。 特点： 蛋白质吸附容量大； 价格便宜； 具有普遍适用性。 * （二）、有机染料亲和层析 有机染料具有类似于NAD+的结构。 需核苷酸类物质为辅酶的酶，对染料具有一定亲和力。 染料共价偶联到琼脂糖载体上，能制得亲和层析柱。 染料亲和层析已成功的分离纯化了多种酶。 * 亲和层析 一 、原理 二 、亲和层析载体 三 、亲和配基 四 、载体的活化与偶联 五 、影响吸附亲和力的因素 六 、配基与间隔臂的连接 七 、亲和层析的吸附和洗脱 八、其他亲和层析 * 第二节 其他亲和纯化技术 一、亲和过滤（膜分离） 二、亲和分配（双水相萃取） 三、亲和反胶团萃取（反胶团萃取） 四、亲和沉淀（沉淀分级） 五、亲和电泳（电泳） * 一、 亲和过滤（Affinity Filtration） 将亲和层析和膜过滤技术结合运用，包括亲和错流过滤