第七章 真核基因的表达.ppt

定义：出现在DNA结合蛋白质和其它蛋白质中的一种结构基元（motif）。当来自同一个或不同多肽链的两个α-螺旋的疏水面（常常含有亮氨酸残基）相互作用形成一个圈对圈的二聚体结构时就形成了亮氨酸拉链。 D.碱性-螺旋-环-螺旋 bHLH蛋白的DNA结合能力分析 E. 同源域蛋白 编码60个保守氨基酸序列的DNA片段 具有转录调节功能：类似于HTH，主要与大沟结合 （2）转录活化结构域 转录激活结构域（transcription activation domains）一般由20-100个氨基酸残基组成。如GAL4分子中有2个这种结构域，分别位于多肽链的第147-196位和第768-881位；GCN4的转录激活结构域位于多肽链的第106-125位。 a. 酸性α-螺旋(acidic α-helix) 该结构域含有由酸性氨基酸残基组成的保守序列，多呈带负电荷的亲脂性α-螺旋，包含这种结构域的转录因子有GAL4、GCN4、糖皮质激素受体和AP-1/Jun等。增加激活区的负电荷数能提高激活转录的水平。可能是通过非特异性的相互作用与转录起始复合物上的TFIID等因子结合生成稳定的转录复合物而促进转录。 b. 谷氨酰胺丰富区(glutamine-rich domain) SP1的N末端含有2个主要的转录激活区，氨基酸组成中有25%的谷氨酰胺，很少有带电荷的氨基酸残基。酵母的HAP1、HAP2和GAL2及哺乳动物的OCT-1、OCT-2、Jun、AP2和SRF也含有这种结构域。 C.脯氨酸丰富区(proline-rich domain) CTF家族（包括CTF-1、CTF-2、CTF-3）的C末端与其转录激活功能有关，含有20%-30%的脯氨酸残基。 五、真核生物转录水平后的 基因表达调控 (一)RNA的加工成熟 (二)翻译水平的调控 (三)翻译后水平的调控 (四)蛋白质合成后的靶向输送 (一)RNA的加工成熟 1、rRNA和tRNA的加工成熟 (1)rRNA的加工：分子内的切割和化学修饰 rRNA化学修饰：甲基化 原核生物：碱基甲基化 真核生物：核糖甲基化 5 组蛋白乙酰化及去乙酰化对基因表达影响 组蛋白N端尾巴上的赖氨酸的乙酰化中和了组蛋白尾巴的正电荷，降低了它与DNA的亲和性，导致核小体构象变化，利于转录调节蛋白质和染色质构象的变化，提高基因转录活性。 乙酰化抑制了核小体的浓缩 三种类型的修饰影响染色质 五、染色质结构与基因表达调控 按功能状态的不同可将染色质分为活性染色质和非活性染色质，所谓活性染色质是指具有转录活性的染色质；非活性染色质是指没有转录活性的染色质。 活性染色质由于核小体构型发生构象的改变，往往具有疏松的染色质结构从而便于转录调控因子与顺式调控元件结合和RNA聚合酶在转录模板上滑动。 (一) 活性染色质定义 真核细胞中基因转录的模板是染色质而不是裸露的DNA，因此染色质呈疏松或紧密结构，即是否处于活化状态是决定RNA聚合酶能否有效行使转录功能的关键。 (二) 活性染色质的主要特点 在结构上： 活性染色质上具有DNaseI超敏感位点 活性染色质上具有基因座控制区 活性染色质上具有核基质结合区（MAR序列） 每个活跃表达的基因都有一个或几个超敏感位点，大部分位于基因5′端启动子区域，一般在50-200bp之间。 超敏感位点的存在对基因表达是必需的。 例在鸡β-珠蛋白基因簇中，胚胎时期的超敏感点只出现在胚胎型基因里；成体时期超敏感点出现在成体型基因里而不是胚胎型基因的5′端。 1、DNAaseI超敏感位点 染色体DNA上一种顺式作用元件，结构域中含有多种反式作用因子的结合序列，可能参与蛋白质因子的协同作用，使启动子处于无组蛋白状态。 2、基因座控制区 MAR一般位于DNA放射环或活性转录基因的两端。在外源基因两端接上MAR，可增加基因表达水平倍以10上，说明MAR在基因表达调控中有作用。是一种新的基因调控元件。 3、核基质结合区（MAR） (三)活性染色体结构变化 1. 对核酸酶敏感 活化基因常有超敏位点，位于调节蛋白结合位点附近。 2. DNA拓扑结构变化 天然双链DNA均以负性超螺旋构象存在； 基因活化后 RNA-pol 正超螺旋 负超螺旋 转录方向 3. DNA碱基修饰变化 真核DNA约有5%的胞嘧啶被甲基化， 甲基化范围与基因表达程度呈反比。 4. 组蛋白变化 ① 富含Lys组蛋白水平降低 ② H2A, H2B二聚体不稳定性增加 ③ 组蛋白修饰 ④ H3组蛋白巯基暴露 （一）真核基因结构 （二）顺式作用元件 （三）反式作用因子 四、真核生物转录水平上的 基因表达调控 “基因”的分子生物学定义：产生一条多肽