免疫学检测技术基本原理.pptVIP

2017-11-25 电子科技大学 生命科学与技术学院 1 免疫诊断 抗原或抗体的检测 免疫细胞的检测 免疫检测方法的应用 2017-11-25 电子科技大学 生命科学与技术学院 2 抗原抗体反应的特点 特异性 可见性 可逆性 2017-11-25 电子科技大学 生命科学与技术学院 3 影响抗原抗体反应的其它因素 电解质 酸碱度 温度 2017-11-25 电子科技大学 生命科学与技术学院 4 抗原-抗体反应的基本检测方法 根据抗原的性质、结合反应的现象、参与反应的成分因素，可将抗原抗体反应分为 凝集反应(agglutination) 沉淀反应(precipitation) 补体参与的反应 采用标记物的抗原抗体反应等 2017-11-25 电子科技大学 生命科学与技术学院 5 凝集反应 2017-11-25 电子科技大学 生命科学与技术学院 7 单向免疫扩散(single immunodiffusion) 2017-11-25 电子科技大学 生命科学与技术学院 8 双向免疫扩散(double immunodiffusion) 2017-11-25 电子科技大学 生命科学与技术学院 9 免疫电泳(immunoelectrophoresis) 2017-11-25 电子科技大学 生命科学与技术学院 10 对流免疫电泳 2017-11-25 电子科技大学 生命科学与技术学院 11 免疫比浊(immunonephelometry) 在一定量抗体中分别加入递增量的抗原，经一定时间形成免疫复合物，液体混浊。用浊度计测量反应液体的浊度，复合物形成越多则浊度越高，可绘制标准曲线并依据反应液体的浊度推算样品中抗原含量。 2017-11-25 电子科技大学 生命科学与技术学院 12 补体参与的反应 应用抗体与红细胞表面的抗原结合，激活反应体系中的补体成份，能导致红细胞溶解，则可根据溶血现象判定试验结果。如溶血空斑试验、HLA的血清学分型等 2017-11-25 电子科技大学 生命科学与技术学院 13 采用标记物的抗原抗体反应 免疫标记技术指用荧光素、酶或放射性核素、胶体金等标记抗体或抗原，进行抗原-抗体反应，是目前应用最为广泛的免疫学检测技术。标记物与抗体或抗原连接后并不改变后者的免疫特性，具有灵敏度高、快速、可定性、定量、定位等优点 2017-11-25 电子科技大学 生命科学与技术学院 14 免疫荧光法(immunofluorescence, IF) 2017-11-25 电子科技大学 生命科学与技术学院 15 酶免疫测定(enzyme immunoassay, EIA) 将抗原-抗体反应的特异性与酶催化作用的高效性相结合，通过酶作用于底物后的显色反应判定结果。可用目测定性，也可用酶标测定仪测定光密度（OD）值以反映抗原含量，灵敏度可达每毫升ng甚至pg水平。常用于标记的酶有辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, AP)等。 2017-11-25 电子科技大学 生命科学与技术学院 16 酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA) 2017-11-25 电子科技大学 生命科学与技术学院 17 其它常用标记方法 放射免疫测定法(radioimmunoassay, RIA) 化学发光免疫分析：将发光物质（如吖啶酯、鲁米诺等）标记抗原或抗体进行反应，发光物质在反应剂（如过氧化阴离子）激发下生成激发态中间体，当激发态中间体回到稳定的基态时发射出光子，用自动发光分析仪接收光信号，测定光子产量，以反映待检样品中抗体或抗原含量。 免疫胶体金法 A\B分别粘贴吸水材料，免疫金复合物干片粘贴在近下端C处，紧贴其上为硝酸纤维素膜条 2017-11-25 电子科技大学 生命科学与技术学院 19 免疫印迹法(Western blot) 将凝胶电泳与固相免疫结合，将通过电泳所区分的蛋白质转移至固相载体，再借助酶免疫、放射免疫等技术进行测定。 第一步，SDS 第二步，将通过电泳而分离的蛋白质转印至硝酸纤维膜上（电转印法） 第三步，类似ELISA C E M SDS 2017-11-25 电子科技大学 生命科学与技术学院 21 免疫细胞的检测 免疫细胞的鉴定分离 免疫细胞功能的测定 流式细胞术 流式细胞术(flow cytometry，FCM)是借助荧光活化细胞分类仪(fluorescence-activated cell sorter, FACS)对细胞进行快速、准确鉴定和分类的技术。流式细胞仪集光学、流体力学、电子学和计算机技术于一体，可对细胞作多参数定量测定和综合分析。