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巴豆油HPLC―ELSD指纹图谱探究 　　【摘 要】目的：建立巴豆油部分的高效液相色谱指纹图谱，为科学评价与有效控制巴豆油质量提供新方法和依据。方法：采用HPLC-ELSD法，测定10批巴豆样品。结果：在色谱指纹图谱中，确立了其中14个共有峰，建立了巴豆油部分的共有模式，10批样品指纹图谱相似度在0.758～0.998之间。结论：该方法简便、准确、重现性好，为评价巴豆油的定性鉴别及内在质量提供了科学依据。 【关键词】巴豆油；亚油酸；HPLC-ELSD；指纹图谱 【中图分类号】R284 【文献标识码】A 【文章编号】1004―7484（2013）09―0030―02 巴豆油来源于中药材巴豆（大戟科植物巴豆Croton tiglium L.的干燥成熟果实）。巴豆主产于西南及福建、湖北、湖南、广东、广西等地[1]。性辛，热；有大毒，归胃、大肠经。内服泻下寒积，逐水消肿，祛痰利咽，外用蚀疮，可用于恶疮疥癣[2]。因其毒性较大，多制成霜剂使用。巴豆中的脂肪油是其主要活性成分，同时也是其有毒成分。目前，有文献报道可以用气相色谱-质谱联用仪法测定巴豆中脂肪酸的含量测定以及指纹图谱的研究[3，4]，但气相色谱法-质谱联用仪只能测到脂肪油中的游离型脂肪酸，该方法具有很大的局限性。除此之外，有文献报道有关巴豆非脂肪油部分HPLC指纹图谱研究[5]，但尚未见有文献报道有关巴豆油的指纹图谱研究，同时鉴于巴豆潜在的重要价值，对其进行指纹图谱研究具有重大意义[6]。 1 实验材料 1.1仪器：Shimadzu高效液相色谱仪（配SIL-20A自动进样器， SPD-20A二极管阵列检测器，CTO-20A柱温箱，Shimadzu LC Solution色谱工作站，日本Shimadzu公司），Agilent Eclipse XDB-C18 色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），METTLER TOLEDO AB204-N电子分析天平，SEDEX75蒸发光散射检测器，ULTRASONIC CLEANER超声仪。 1.2试药： 10批巴豆药材分别购自四川、广西、云南等三个主产区，所购药材经广州中医药大学新药开发研究中心赖小平研究员鉴定为大戟科植物巴豆的成熟果实，结果见表1。亚油酸（中国药品生物制品检定所，批号为116222-200301，纯度98%），供含量测定用。异丙醇为色谱纯、乙腈为色谱纯，高纯氮（广州福北协力气体有限公司），其他试剂为分析纯，水为纯化水。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 Agilent Eclipse XDB-C18 色谱柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：乙腈：异丙醇（53：47）等度洗脱；流速0.8mLmin-1；蒸发光散射检测器；柱温25℃；进样量10μL；记录时间60min；进样量10μL。理论塔板数以亚油酸峰计算，应不低于3000。 2.2巴豆油的制备：取购于不同的产地共10批干燥的巴豆种子，去壳后将种仁粉碎，取约50g，精密称定，用滤纸包裹，置索氏提取器中，加适量乙醚，40℃水浴加热，提取8h，蒸干乙醚提取液，放冷，得巴豆油（浅黄色油状，相对密度为0.90gmL-1），备用。 2.3 供试品溶液制备：精密称取200mg左右的巴豆油置于10mL容量瓶中，加流动相乙腈：异丙醇（53：47）溶解，超声使其溶解完全，然后稀释至刻度，取适量溶液，以0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。 2.4 参照物溶液的制备：精密称取亚油酸对照品适量，加乙腈：异丙醇（53：47）溶解制成0.525 gmL-1的参照物溶液。以0.45μm微孔滤膜滤过，即得。 2.5 方法学考察 2.5.1 精密度试验：取10号供试品1份， 按2.2项下样品制备方法制备后，按2.1项下色谱条件，连续进样6次，记录色谱图，计算其各共有峰相对保留时间、相对峰面积的RSD均小于3%，表明精密度良好，符合对指纹图谱的要求。 2.5.2 稳定性试验：取10号供试品1份，按2.2项下样品制备方法制备后，按2.1项下色谱条件，分别在0，2，4，6，8，10，12，24h进样，记录色谱图，计算其各共有峰相对保留时间、相对峰面积的RSD均小于3%，表明24h内供试品溶液的成分稳定，符合对指纹图谱的要求。 2.5.3 重复性试验：精密量取10号供试品6份，每份2mL，按照2.2项下样品制备方法制备，平行制得6份供试品溶液。按2.1项下色谱条件进样，记录色谱图，计算其各共有峰相对保留时间、相对峰面积的RSD均小于3%，表明实验重复性良好，符合对指纹图谱的要求。 2.6 样品测定： 取10批巴豆供试品，按2.2项下方法制备供试品溶液，在2.1项下的色谱条件下依次进样检测，记录色谱图