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植物糖蛋白提取分离和体外抗氧化性探究 　　摘 要：植物糖蛋白在试验中证实其抗氧化性优越，搭配合理的提取分离使其充分利用起来必然可以获得良好的经济效益和环境效益。本文重点就当前的提取分离方法和抗氧化测定方法进行总结，为商业、工业普及等提供参考。 关键词：糖蛋白；提取分离；抗氧化性 我国植物覆盖率很高，充分利用植物提取生物的抗氧化物质运用于工业、商业乃至生活中，必然能达到很好的经济效益，从而促进经济可持续发展。糖蛋白是一类由糖类同多肽或蛋白质以共价键连接而形成的结合蛋白，普遍存在植物中，特别是在部分工业产物的副产物中，充分再利用能起到有效的资源配置。 一、糖蛋白的提取分离研究进展 水提取法 秦宏伟等[1]人的研究结果表明：甘薯糖蛋白提纯最佳条件为室温条件下水浸提，料液比为1：6，提取时间1h，提取次数3次，上清液加无水乙醇沉淀，透析3d，用DEAE-52和SepHadex G-100 柱层析，经定性、定量分析得到甘薯糖蛋白纯品。 盐溶液或缓冲溶液浸提 袁燕等[2]用20 mmol/L PBS，PH 7.2 （内含2. 5mol/L （NH4 ） 2 SO4 ）的缓冲液平衡疏水预装柱Hip repTM pHenyl FF （High sub， 20 mL）4个柱体积，进样，用去离子水按0～80%线性梯度洗脱11个柱体积， 4 mL /min， 280 nm紫外吸收检测，按峰高用分部收集器收集提取了蒜头果蛋白。 醇溶液提取 K0等[3]将漆树果实粉碎，在黑暗的地下室用99%乙醇浸渍数月，然后用滤纸过滤乙醇浸提物，经旋转蒸发仪浓缩，冷冻干燥，并经硅胶柱层析，收集70%乙醇洗脱液，再经冻千、盐析、透析等步骤获得糖蛋白。 酸碱溶液提取 孙艳丽[4]等人用pH 值为6.5～7.5 的1%的亚硫酸氢钠溶液可较好的从甘薯叶片中提取可溶性蛋白质。经浸提、沉淀、透析、冻干处理获得的台农叶片蛋白粉中含有62.6%粗蛋白。 还有酶解法提取，是将不溶性糖蛋白转化为可溶性糖肽、游离肽或氨基酸，从而提高提取率。 二、抗氧化能力测定方法的研究进展 抗氧化能力的测定方法主要包括体内和体外评价两大类，但是体内环境复杂，多用体外评价方法，体外研究为体内研究奠定了基础。 过氧化值（PV）法 此法是测量脂质氧化最常用的方法，反映了脂质和含脂原料中氢过氧化物和脂质过氧化物的总含量。测量PV 的方法有很多，但其原理均系碘化氢还原。但是碘化氢易被氧化，还极易与碳碳双键加成，而且生成的碘也能与不饱和双键加成，使测得的结果偏低。 （1）硫氰酸铁（FTC）法。此法是根据脂质氧化产生的过氧化物将Fe2 + 氧化成Fe3 + ，Fe3 + 与硫氰酸铵反应，生成的硫氰酸铁在500 nm 处有强吸收，通过500 nm 吸光度的变化可测得过氧化物的含量。 （2）DPPH法。DPPH法可分为动力学法和静力学法2种。DPPH乙醇溶液中呈深紫色，在517nm处有最大吸收峰，当有自由基清除剂（AH）：存在时，其单电子被结合而使其颜色减褪，在最大吸收波长处的吸光度减小，减小的程度与清除剂的清除能力（AIP表示，IP值越大，样本抗氧化能力越强。Rathee等[5]用DPPH法测nagkesar的甲醇提取物和水-乙醇提取物的抗氧化性，结果显示甲醇提取物的清除能力（IC508.33±0.39lg/ml）优于水-乙醇提取物的清除能力。 （3）化学发光（CL）法。其基本原理是活性自由基氧化发光剂能发光，发出的光可由发光计检测，容易记录。抗氧化剂是活性自由基清除剂，它能抑制CL ，使发光强度减弱，通常有一个明确的诱导期（ tIND） 。抗氧化活性以Trolox 当量的形式给出。由抗氧化剂抑制CL的能力（由t IND估算） 与Trolox 抑制CL 能力的比值可定量得出样品的抗氧化能力。 （4）TRAP法。其原理是，抗氧化剂干扰由AAPH 或ABAP 产生的自由基与目标探针之间的反应，目标探针已使用的有R - 藻红蛋白荧光物质，ABTS 吸光度，耗氧量，最后以抗氧化剂滞后反应时间来比较抗氧化能力的大小，结果用Trolox 当量来表示。 （5）清除超氧阴离子自由基能力的测定。主要有邻苯三酚自氧化法（MTT），即邻苯三酚在碱性条件下自动氧化，不断释放出OO?又可进一步促进自氧化。在邻苯三酚自氧化30～40s后，中间物积累浓度与时间呈线性关系，一般线性时间可维持4min左右，可求得自氧化速率来表征Ogress氏显色剂，使反应体系呈现紫红色，蒸馏水调零，用分光光度计测550nm处的吸光度，计算出试样溶液对O2- （6）清除羟基自由基能力的测定。Fenton反应是最常见的产生羟自由基的化学反应：H2O2+ Fe2+→ Fe3+