小胶质细胞论文：小胶质细胞淀粉样蛋白寡聚体海风藤提取物阿尔茨海默病.docVIP

小胶质细胞论文：小胶质细胞 淀粉样蛋白寡聚体 海风藤提取物 阿尔茨海默病 【中文摘要】阿尔茨海默病(AD)发病机理至今仍不清楚,研究者提出了多种可能的假说。其中,炎症学说在体内和体外研究中均取得了可信的证据。目前已知,小胶质细胞能够被神经炎性斑的主要成分β淀粉样蛋白(Aβ)激活。迄今为止,人们尚未找到特异性治疗AD的有效方法。海风藤是一种用于治疗跌打损伤、哮喘等疾病的传统中药,最近的研究发现,海风藤提取物能够抑制β淀粉样前体蛋白(β-APP)基因的表达和Aβ的合成,但对小胶质细胞的异常活化是否有影响,国内外尚无类似研究。体外培养小胶质细胞,研究纤丝状和寡聚体β淀粉样蛋白(β-amyloid, Aβ)25-35对小胶质细胞的激活作用,以及海风藤提取物对纤丝状和寡聚体Aβ25-35激活小胶质细胞作用的影响。方法：取新生大鼠的大脑组织,制备成细胞悬液后进行混合细胞培养,再将小胶质细胞从混合培养的细胞群中分离。以CDllb为特异性抗原标志,利用免疫细胞化学染色方法,鉴定小胶质细胞。分别用纤丝状Aβ25-35、寡聚体Aβ25-35、纤丝状Aβ25-35+海风藤提取物、纤丝状Aβ25-35+DMSO、寡聚体Aβ25-35+海风藤提取物以及寡聚体Aβ2535+DMSO干预小胶质细胞,并设立空白对照组。干预48小时后,倒置相差显微镜下观察不同处理组小胶质细胞的形态变化。以CD68作为小胶质细胞活化的特异性抗原标志,利用免疫细胞化学染色方法,对小胶质细胞的活化进行定性检测,并比较不同处理组间的差异。结果：1)通过CDllb免疫细胞化学染色,证实分离得到的细胞主要为小胶质细胞,CDllb表达阳性率达到98%,而以PBS代替一抗的阴性对照组CDllb表达阳性率仅有5.4%,P0.05。2)干预48小时后,纤丝状Aβ25-35及寡聚体Aβ25-35组小胶质细胞形态发生明显变化,胞体增大,突起回缩变短,呈阿米巴样改变,为典型的激活后小胶质细胞的形态。而纤丝状Aβ25-35+海风藤提取物和寡聚体Aβ25-35+海风藤提取物组的小胶质细胞形态变化则不如上述两组明显。3)CD68免疫细胞化学染色显示,每组小胶质细胞都有一定程度的活化,但各组小胶质细胞表达CD68的阳性率不同,P0.05。六个实验组的小胶质细胞CD68表达阳性率均高于空白对照组(5.1%),P0.004。寡聚体Aβ25-35组的CD68表达阳性率(71.2%)高于纤丝状Aβ25-35组(60.8%),P0.002。纤丝状Aβ25-35+海风藤提取物组CD68表达阳性率(52.1%)低于纤丝状Aβ25-35组(60.8%),P0.002。寡聚体Aβ25-35组(71.2%)和寡聚体Aβ25-35+海风藤提取物组(67.0%)的CD68表达阳性率无明显差异,P=0.005。结论：1)成功进行了小胶质细胞的体外分离纯化培养,该方法获得的小胶质细胞纯度高,能够满足后续实验的要求。2)证实纤丝状Aβ25-35和寡聚体Aβ25-35均能激活小胶质细胞,且寡聚体Aβ25-35激活小胶质细胞的能力强于纤丝状Aβ25-35。3)排除了溶剂DMSO的影响后,证实海风藤提取物能够抑制纤丝状Aβ25-35对小胶质细胞的激活作用,对寡聚体Aβ25-35的激活作用无明显影响。 【英文摘要】Background:The pathogenesis of Alzheimer’s disease (AD) still remains unknown now, but several different theories have been suggested by researchers. The inflammation theory is one of the most possible mechanisms supported by in vitro and in vivo evidences. The activation of microglia can be stimulated by beta-amyloid (Aβ), the main component of neuritic plaques. Up to now, there is still no effective therapy for AD. Piper Kadsura Ohwi is a kind of Chinese herbal drug traditionally used to treat trauma and asthma, etc.. Recent studies revealed that extracts of Piper Kadsura Ohwi may inhibit expression ofβ-amyloid precurs