细胞生物学--第七章 线粒体和过氧化物酶体.ppt

线粒体和过氧化物酶体 ? 线粒体的发现与功能研究 ◆1850年，德国生物学家Rudolph K?lliker第一系统的研究了线粒体。(肌细胞) ◆ 1900年，Leonor Michaelis 氧化还原反应　 ◆ 1943年，Arbert Claude　采用盐法分离技术分离到线粒体　 ◆ 1948年George Hogeboom等采用蔗糖介质分离有活性的线粒体 能量转换的部位 　　　逐步证明了线粒体具有Krebs循环、电子传递、氧化磷酸化的作用，从而证明了线粒体是真核生物进行能量转换的主要部位。 ◆标志酶:单胺氧化酶; ◆外膜含有较大的通道蛋白:孔蛋白; ◆标志酶:腺苷酸激酶 ◆功能:建立电化学梯度 ?线粒体基质(matrix) ◆标志酶:苹果酸脱氢酶 ◆功能:进行氧化反应， 主要是三羧酸循环 ?蛋白质的两种运输方式 ●翻译后转运 游离核糖体上合成的蛋白质释放到胞质溶胶后被运送到不同的部位， 即先合成，后运输。在合成释放之后需要自己寻找目的地，又称为蛋白质寻靶。 ●共翻译转运 膜结合核糖体上合成的蛋白质通过定位信号，一边翻译，一边进入内质网，在翻译的同时进行转运定位， 通过信号肽，经过连续的膜系统转运分选才能到达最终的目的地，称为蛋白质分选。 ◆前导肽(leading peptide) 将游离核糖体上合成的蛋白质的N-端信号称为导向信号，或导向序列，由于这一段序列是氨基酸组成的肽，所以又称为转运肽。 ◆信号肽(signal peptide) 　　　将膜结合核糖体上合成的蛋白质的N-端的序列称为信号序列，将组成该序列的肽称为信号肽。 ●长约20-80个氨基酸，通常带正电荷的碱性氨基酸(特别是精氨酸和赖氨酸)含量较为丰富; ●序列中不含有或基本不含有带负电荷的酸性氨基酸，并且有形成两性(既亲水又疏水)α螺旋的倾向。 有利于穿过线粒体的双层膜； ●需要消耗能量; ●需要分子伴侣。 ◆前导肽的特异性 　●具有细胞结构的特异性 　●前导肽的不同片段含有不同的信息（双导向序列） ◆如何证明前导肽引导 蛋白质进入线粒体? P274 ●分离线粒体 ●与具有线粒体基质定位信号的前体蛋白温育 ●胰蛋白酶处理 7.3.2 线粒体蛋白定位 ?线粒体基质蛋白定位 定位需要两个导向序列，基质导向序列和膜间隙导向序列。这类蛋白有两种转运定位方式。 保守性寻靶 前体蛋白在N-端的基质导向序列引导下采用与线粒体基质蛋白同样的运输方式，将前体蛋白转运到线粒体基质， 在基质中由前导肽酶切除基质导向序列后， 膜间隙导向序列就成了N端的导向序列， 它能够识别内膜的受体和转运通道蛋白，引导蛋白质穿过内膜，进入线粒体膜间隙，然后由线粒体膜间隙中的前导肽酶将膜间隙导向序列切除。 在线粒体基质导向序列的引导下，通过线粒体的外膜和内膜，但是疏水的膜间隙导向序列作为停止转运序列锚定在内膜上，从而阻止了蛋白质的C-末端穿过内膜进入线粒体基质； 然后通过蛋白质的扩散作用，锚定在内膜上的蛋白逐渐离开转运通道，最后在前导肽酶的作用下，将膜间隙导向序列切除，蛋白质释放到膜间隙。 只需一个前导肽，引导外膜和内膜蛋白穿膜，前导肽后面一段疏水的停止转运序列阻止转运蛋白进一步穿膜， 外膜蛋白：停止转运序列与外膜转运酶结合 P274 内膜蛋白：停止转运序列与内膜转运酶结合 7.4 线粒体的功能:氧化磷酸化作用 7.4.1 真核细胞中的氧化作用 ?糖的有氧氧化(细胞氧化或生物氧化): 葡萄糖(或糖原)在正常有氧的条件下， 氧化后产生CO2 和水， 分为三个阶段 ◆糖氧化成丙酮酸 ◆丙酮酸脱羧生成乙酰CoA ◆乙酰CoA进入三羧酸循环彻底氧化 糖酵解(glycolysis)： 细胞质中的葡萄糖(或糖原)在一系列酶的催化下生成丙酮酸的过程。 细胞质中 不耗氧 ◆丙酮酸跨膜进入线粒体基质； ◆在丙酮酸脱氢酶(pyruvate dehydrogenase)作用下氧化成乙酰辅酶A。 ●必要时也会利用脂肪: ▲脂肪被水解生成脂肪酸; ▲脂肪酸能够进入线粒体基质，通过β氧化途径(β-oxidation pathway)循环氧化生成乙酰辅酶A。 (tricarboxylic acid cycle， TCA) 又叫Krebs循环、柠檬酸循环。 7.4.2 呼吸链与电子传递 ?线粒体能量转换策略 　◆三羧酸循环中的能量转换 　　 NAD+ → NADH 　　FAD+ → FADH2 　◆NADH和FADH2必须被氧化才能维持三羧酸循环 　　 NADH + 1/2 O2 → NAD+ + 能量 　　 FADH2 + 1/2 O2 → FAD+ + 能量