突变肠杆菌株NRS-1中5个草甘膦逆境应答基因的克隆与功.PDFVIP

微生物学通报 Aug. 20, 2016, 43(8): 1690−1698 Microbiology China /wswxtbcn tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.150675 研究报告 突变肠杆菌株 NRS-1 中5 个草甘膦逆境 应答基因的克隆与功能研究 费云燕 盖钧镒 赵团结* (南京农业大学大豆研究所 国家大豆改良中心 农业部大豆生物学与遗传育种重点实验室(综合)/ 作物遗传与种质创新国家重点实验室 江苏 南京 210095) 摘 要：【目的】微生物对草甘膦的抗性受复杂的遗传体系调控，涉及靶基因和大量相关调控基 因。对肠杆菌属细菌 NRS-1 突变菌株在高浓度草甘膦逆境下的 5 个重要差异表达基因进行功能 研究，以期深入了解非靶标基因在抗草甘膦微生物的作用特点，为发掘优异基因资源，服务抗草 甘膦转基因生物育种提供参考。【方法】NRS-1 的差异表达基因可能在蛋白质合成、代谢、细胞 膜等水平发挥作用，保护细胞免受高浓度草甘膦逆境，因此分别选取易位酶延伸因子 fusA 、丁 二酸脱氢酶 sdhA、胸苷磷酸化酶deoA 、鸟氨酸氨甲酰转移酶argF 、周质蛋白osmY 进行克隆， 采用大肠杆菌原核表达、转化拟南芥实验研究其功能，并通过细菌双杂及 KEGG pathway 分析基 因间互作特点。【结果】在明确 5 个基因结构特点基础上，通过大肠杆菌原核表达及转基因拟南 芥鉴定，发现这 5 个基因及草甘膦的靶基因 5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合成酶基因 aroA 对提高 2 种生物的草甘膦耐性均有不同程度的作用，其中 argF 、deoA 的抗性较好，与 aroA 相当，表明 在应对草甘膦逆境时，芳香族、含有胸腺嘧啶氨基酸及精氨酸的合成代谢通路可能起重要作用； 利用基因互作与 KEGG 分析发现 5 个基因与靶基因 aroA 间形成复杂的调控网络，但无直接的蛋 白互作。【结论】NRS-1 的 5 个差异表达基因对草甘膦逆境具有抗性，argF 、deoA 优于其他 3 个 基因，其与靶基因 aroA 间表现复杂的基因互作关系。 关键词：肠杆菌，抗草甘膦，差异表达基因，基因互作，调控网络 Foundation item: The MOA Special Project for Transgeinc Crop Breeding (No. 2014Z010); The MOE Program (No. PCSIRT13073); The Jiangsu Collaborative Innovation Center for Modern Crop Production Program (No. JCIC-MCP); National Natural Science Foundation of China (No. *Corresponding author: E-mail: tjzhao@ Received: September 10, 2015; Accepted: January 12, 2016 基金项目：转基因生物新品种培育重大专项项目(No. 2014Z010) ；长江学者和创新团队发展计划项目 (No. PCSIRT13073) ；江苏省现代作物生产协同创新中心项目(No. JCIC-MCP) ；国家自然科学基金面上 项目(No. *通讯作者：E-mail ：tjzhao@ 收稿日期：2015-09-10 ；接受日期：2016-01-12 费