分子缝合针——DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙.PPT

1.1 DNA重组技术的基本工具 基因工程 基因工程又叫做DNA重组技术。 是在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切” 和“拼接”，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的新的生物类型和生物产品。 对基因工程概念的理解： 基因工程别名： 操作对象： 操作环境： 实质或原理各是什么： 操作水平： 操作过程： （一）限制性核酸内切酶----“分子手术刀” (1)来源： (2)特点： 表现在两个方面: 一识别双链DNA分子中特定的核苷酸序列, 二在特定核苷酸序列中的具有特定的切割位点。 这体现了限制酶具有专一性 (3)作用实质 使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开（切割DNA分子） 　 　 （二）“分子缝合针”——DNA连接酶 　 (三)“分子运输车” ——基因进入受体细胞的载体 ⒈载体需要的条件： 　　⑴有1~多个限制酶切点 　　⑵对受体细胞无害 　　⑶导入基因能在受体细胞中复制、表达 　　⑷有某些标记基因，便于筛选 (5)结构简单，大小适中。 ⒉常用运载体种类： 　 ⑴细菌的质粒 　 ⑵噬菌体或某些动植物病毒 小结 例1：科学家们经过多年的努力，创立了 一种新兴生物技术——基因工程，实施该 工程的最终目的是 A. 定向提取生物体的DNA分子　　　　　 B. 定向地对DNA分子进行人工“剪切” C. 在生物体外对DNA分子进行改造　　　 D. 定向地改造生物的遗传性状 * * T 磷酸二酯键 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 A 限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线（如图），中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向、对称、重复排列的。 G A A T T C C T T A A G C C C G G G G G G C C C EcoRⅠ （4）作用结果：  黏性末端和平末端 SmaⅠ EcoR Ⅰ 黏性末端　　　　 黏性末端 EcoRⅠ 黏性末端　　　　 黏性末端 Sma Ⅰ 平末端　　　平末端 限制酶存在于原核细胞中的作用是什么？为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA？ 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性(平)末端？ 要切两个切口，产生四个黏性(平)末端。 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性(平)末端，然后让两者的黏性(平)末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。 思考? ……GAATTC…… ……CTTAAG…… ……GAATTC…… ……CTTAAG…… EcoRⅠ ……GAATTC…… ……CTTAAG…… ……GAATTC…… ……CTTAAG…… 不同来源的DNA片段混合 将不同种来源的DNA片段连接起来 生物A基因片段 生物B基因片段 ……G　　AATTC…… ……CTTAA　　G…… ……G　　AATTC…… ……CTTAA　　G…… 酶切 ①作用: 把切下来的DNA片段拼接成新的DNA，即将脱氧核糖和磷酸连接起来. ②作用原理： 催化磷酸二酯键形成 ③类型： 不同类型DNA连接酶的比较： ③类型： 类型 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 来源 功能 大肠杆菌 T4噬菌体 恢复 磷酸 二酯键 只能连接黏性末端 能连接黏性末端和平末端(效率较低) 相同点 差别 （二）“分子缝合针”——DNA连接酶 可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来， E·coli DNA连接酶　　　　　　　　或T4DNA连接酶 即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 T4DNA连接酶 相同点 区别 DNA连接酶 DNA聚合酶 寻根问底 DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗?为什么? 只能将单个核苷酸连接到已有的DNA片段上，形成磷酸二酯键 形成磷酸二酯键 在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 　⑶假如目的基因导入受体细胞后不能复制或不能转录，转基因生物能有预想的效果吗？ 　⑴作为分子运输车——载体，如果没有切割位点将会怎样？ 　⑵霍乱菌的质粒多个限制酶切点，你会用它来做分子运输车吗？ 　⑷目的基因有没有进入受体细胞，如何去发现？ 运载体：常用质粒 质粒特点： 1、质粒结构简单，大小适中 2、能自我复制并在受体细胞中稳定存在 3、有一个或多个限制酶切点 4、有特殊的遗传标记基因 注意：真正用作运载体的质粒都是人工改造过的。 基因工程 的工具 限制 酶 主要存在于原核生物中 具有专一性(识别序列) 切开DNA分子的磷酸二酯键 DNA连 接酶