基于ITS2序列的羌活及其混伪品的DNA条形码鉴定.PDF

• 568 • 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 3 期 2012 年 3 月 基于 ITS2 序列的羌活及其混伪品的 DNA 条形码鉴定 1 2* 2 2 孙稚颖 ，陈士林 ，姚 辉 ，宋经元 1. 山东中医药大学药学院，山东 济南 250355 2. 中国医学科学院 北京协和医学院药用植物研究所，中草药物质基础与资源利用教育部重点实验室，北京 100193 摘 要：目的 对羌活及其混伪品进行分子鉴定，以确保该药材的质量以及临床疗效。方法 利用 PCR 测序法，对样品进 行核基因 ITS2 片段扩增并双向测序，所得序列经 CodonCode Aligner 拼接后，用软件 MEGA 4.0 进行相关数据分析，并构建 邻接（NJ ）树。利用已建立的ITS2 数据库及其网站预测 ITS2 二级结构。结果 羌活与宽叶羌活 ITS2 序列长度均为 228 bp ， 二者种内平均 K2P （Kimura-2-parameter ）遗传距离均远远小于其与混伪品的种间平均K2P 遗传距离；由所构建的系统聚类 树图可以看出，羌活与宽叶羌活均表现出了单系性，而同时又与其他混伪品明显分开；比较 ITS2 二级结构发现，羌活基原 植物与其混伪品在 4 个螺旋区的茎环数目、大小、位置以及螺旋发出时的角度均有明显差异。结论 ITS2 序列作为 DNA 条形 码可以方便快捷地鉴别羌活及其混伪品，为其种质资源鉴定及临床安全用药提供了重要分子依据。 关键词：羌活；DNA 条形码；ITS2 ；分子鉴定；遗传距离 中图分类号：R282.12 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2012)03 - 0568 - 04 Identification of Notopterygii Rhizoma et Radix and its adulterants using DNA barcoding method based on ITS2 sequence 1 2 2 2 SUN Zhi-ying , CHEN Shi-lin , YAO Hui , SONG Jing-yuan 1. College of Pharmacy, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250355, China 2. Key Laboratory of Bioactive Substances and Resources Utilization of Chinese Herbal Medicine, Ministry of Education, Institute of Medicinal Plant Development, Chinese Academy of Medical Sciences Peking Union Medical College, Beijing 100193, China Abstract: Objective To discriminate Notopterygii Rhizoma et Radix and its adulterants, and secure the quality and clinical curative effect of this medicinal material. Methods The second internal transcribed spacer (ITS2) of ribosomal DNA was amplified and sequenced by bidirectional sequencing of PCR products. Sequence assembly and consensus sequence generation were performed by using CodonCode Aligner. Phylogenetic study was performed using software MEGA 4.0 in accordance