原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
大肠杆菌表达的RNA解螺旋酶Ded1p的提纯与解-南京农业大学学报
－
南京农业大学学报 ２０１７ꎬ４０(５):８７４ ８８０ ｈｔｔｐ:/ / ｎａｕｘｂ.ｎｊａｕ.ｅｄｕ.ｃｎ
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＮａｎｊｉｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ＤＯＩ:１０.７６８５/ ｊｎａｕ.２０１６０４０２７
－
赵富林ꎬ徐明飞ꎬ谢青云ꎬ等. 大肠杆菌表达的ＲＮＡ解螺旋酶Ｄｅｄ１ｐ 的提纯与解螺旋机制[Ｊ]. 南京农业大学学报ꎬ２０１７ꎬ４０(５):８７４ ８８０.
大肠杆菌表达的ＲＮＡ解螺旋酶Ｄｅｄ１ｐ 的提纯与解螺旋机制
赵富林ꎬ徐明飞ꎬ谢青云ꎬ单衍可ꎬ雷静ꎬ施志玉ꎬ孙海凤ꎬ刘斐∗
(南京农业大学动物医学院ꎬ江苏 南京 ２１００９５)
摘要:[目的]表达、提纯ＤＥｘＨ/ Ｄ￣ｂｏｘ家族蛋白Ｄｅｄ１ｐꎬ并综合传统电泳以及单分子荧光共振能量转移(ｓｍＦＲＥＴ)技术ꎬ探究
Ｄｅｄ１ｐ 的双链ＲＮＡ解螺旋机制ꎮ [方法]原核表达、纯化出全长的Ｄｅｄ１ｐ作为研究蛋白ꎬ并验证其解螺旋酶活性ꎮ 以荧光
对标记的带有３′末端单链 ＲＮＡ尾巴的１３ ｂｐ双链 ＲＮＡ作为研究底物ꎬ基于全内反射的单分子荧光共振能量转移技术ꎬ在
－１ －１ ２＋
自制的样品通道内添加８００ ｎｍｏｌＬ Ｄｅｄ１ｐ、２ ｍｍｏｌＬ ＡＴＰ/ Ｍｇ 以及研究底物进行解螺旋试验ꎬ再用自编的Ｍａｔｌａｂ程序
采集和分析数据ꎬ进而从单分子层面探究 Ｄｅｄ１ｐ 的双链 ＲＮＡ 解螺旋机制ꎮ [结果]首次通过 Ｎｉ￣ＮＴＡ 凝胶亲和层析与
Ｃａｐｔｏ￣ＤＥＡＥ凝胶阴离子交换层析两步纯化手段ꎬ得到了大量纯净的、并且具有双链ＲＮＡ解螺旋酶活性的Ｄｅｄ１ｐꎮ Ｄｅｄ１ｐ 的
ｓｍＦＲＥＴ试验在单分子层面实现了对Ｄｅｄ１ｐ打开１３ ｂｐ双链ＲＮＡ过程的实时观察ꎮ 通过分析ＦＲＥＴ 的变化过程ꎬ首次提出
Ｄｅｄ１ｐ主要以一步解螺旋的方式打开双链ＲＮＡ结构ꎮ [结论]原核表达、纯化的Ｄｅｄ１ｐ具有ＲＮＡ解螺旋酶活性ꎻ该 Ｄｅｄ１ｐ
是以局部双链打开的模式解开ＲＮＡ双链ꎮ
关键词:单分子荧光共振能量转移ꎻＤＥｘＨ/ Ｄ￣ｂｏｘ家族ꎻＤｅｄ１ｐ蛋白ꎻ荧光标记ＲＮＡꎻ局部双链打开
－ － －
中图分类号:Ｓ８５２.２３ 文献标志码:Ａ 文章编号:１０００ ２０３０(２０１７)０５ ０８７４ ０７
Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ＲＮＡ ｈｅｌｉｃａｓｅ Ｄｅｄ１ｐ
ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ
ＺＨＡＯ ＦｕｌｉｎꎬＸＵ ＭｉｎｇｆｅｉꎬＸＩＥ ＱｉｎｇｙｕｎꎬＳＨＡＮ ＹａｎｋｅꎬＬＥＩ ＪｉｎｇꎬＳＨＩ ＺｈｉｙｕꎬＳＵＮ ＨａｉｆｅｎｇꎬＬＩＵ Ｆｅｉ∗
(Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ ＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＮａｎｊｉｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＮａｎｊｉｎｇ ２１００９５ꎬＣｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ:[Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅｓ]Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｗａｓ ｔｏ ｅｘｐｒｅｓｓ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｙ ＤＥｘＨ/ Ｄ￣ｂｏ
文档评论（0）