小麦愈伤组织细胞的姐妹染色单体交换.PDFVIP

L遗 传 学报，17(5):365 盛etaCeaetica及成ca 小麦愈伤组织细胞的姐妹染色单体交换 李士生 张玉玲 （南开大学生物系，天津） 用BrdU标记，改良的FPG法染色，建立了一种植物愈伤组织细胞姐妹染色单体分染的 方法。并对培养基的不同附加成分对 SCE的影响进行了研究。所有培养基上愈伤组织细胞 的SCE率都显著高于正常根尖分生组织细胞。6-BA,AgN4,，高浓度的2,,4-D,蔗塘均可诱 发 SCEO 关键词：愈伤组织，姐妹染色单体交换 目前已在几十种植物的组织培养中发现了染色体变异现象1【1。这些变异有的来源于 外植体中已有变异细胞的分裂，但培养过程中也可诱发出新的变异阁。 自从Wollf等 “”发明了简便的姐妹染色单体分染方法以来，姐妹染色单体交换 S（CE) 测验已作为一个灵敏的指标广泛应用于诱变物质的检测 ，〔。‘ 目前，有关植物培养细胞的 SCE方面的报道还很少。 我们试图探索一种植物愈伤 组织细胞姐妹染色单体分染的方法，并以SCE为指标，研究培养基中的植物激素、蔗搪 以及一些无机离子对培养细胞的诱变作用。 材 料 与 方 法 ·实验所用材料是分别在附加不同成分的MS培养基 表（1)上培养9代(250夭）的“津 丰一55”普通小麦 T（riticumaestivum）的幼穗愈伤组织。这些愈伤组织培养于每天12 小时光照光（强2000Lux),2511℃的条件下，2530天继代1次。在进行该实验时，愈 伤组织细胞大部分是二倍体，此外还有少量的非整倍体和多倍体。 愈伤组织细胞染色体的BrdU标记采用下列方法：在50m]的三角瓶中铺人1cm厚 的海绵。将三角瓶分成6组，分别加人与原固体培养基 表（1)成分相同的6种MS液体培 养基。随机选取各固体培养基上的愈伤组织，移人含有相应液体培养基的三角瓶，在原 条件下培养4天，加人5m1用相应液体培养基配制的BrdU溶液，使最终 BrdU浓度为 2X10rmol/L,25gC暗培养72-120小时。 BrdU标记后，将材料在低温 0（--40C）下预处理24小时，甲醇：冰乙酸 3（:1)固定，在 含有2.5并纤维素酶和2.5务果胶酶的混合酶液中酶解 2（50C)6小时，挑取分生组织区， 涂片，制备染色体标本。 染色体标本的后处理参照张自立等人a]〔的方法。将标本浸入2XSSC溶液，使液面刚 好没过标本，在80℃的水浴中，用30W紫外灯 距（标本Zcm）照射30分钟，1:40Giemsa 染色20分钟。 本文于 1988年 10月24日收到。 366 遗 传 学 报 17卷 衰1 培养墓中的附加成分 Table1Thesupplementaryconstituentsinthemedia 附加成分 一 培养基 Supple. Media 【 11 III IV V VI constituents 1 1 1 1 1 0。5 0。2 30 30 20 60 30 30 10 1)2,4-D:2,4-dichlorophenoxyaceticacid.2)6一BA:6一benzylaminopurine. 小麦根尖细胞姐