黄芩苷对高糖环境下肾小球系膜细胞缝隙连接蛋白43表达的影响.pdfVIP

Website http：／／xuebao．ahtcm．edu．cn E—mail ahxbhjb@163．corn 安徽中医学院学报 第 32卷 第 6期 2013年 12月 J()URNALOFANHUITCM I．EGE Vo1．32 No．6 Dec．2013 黄芩苷对高糖环境下肾小球系膜细胞 缝隙连接蛋 白43表达的影响 林锐珊 ，赵 平。，吴绍锋 ，罗海燕 ，伍趣京 ，苏 宁 (1．广州 中医药大学西医基础公共实验室 ，广东 广州 510006)； 2．广州益善医学检验所 ，广东 广州 510663) [摘要]目的 研究黄芩苷对高糖环境下肾小球系膜细胞 (glomerularmesangialcell，GMC)中缝隙连接蛋白43 (connexin43，Cx43)表达的影响。方法 将体外培养的大鼠GMC分为 6组：低糖组，高糖组，黄芩苷低、中、高 剂量组，蛋白激酶C(proteinkinaseC，PKC)抑制剂组。培养 72h后 ，收集细胞并提取细胞总蛋白，Western-blot 法检测黄芩苷对高糖环境下GMC中PKC和 Cx43表达的影响，用划痕标记染料示踪技术检测黄芩苷对 GMC 缝 隙链接通讯功能(gapjunctionintercellularcommunication，GJIC)的影响。结果 Western—blot结果显示 ，与 低糖组比较 ，高糖组 中PKC蛋白表达量显著增加 (P0．01)，Cx43蛋白表达量显著减少 (P0．01)；黄芩苷 呈剂量依赖性降低 PKC蛋 白表达水平，升高Cx43蛋 白表达水平。划痕标记染料示踪实验结果显示：与低 糖组比较 ，高糖组GMC的GJIC功能缺乏 ，未向邻近细胞传输 ；与高糖组比较 ，PKC抑制剂组罗氏黄 荧光染 料 向划痕两侧邻近细胞传输的层数较黄芩苷各剂量组明显增 多，黄芩苷各剂量组呈剂量依赖性地增加传递 的层数。结论 黄芩苷可剂量依赖性地抑制高糖环境下 GMC中PKC的异常活化 ，从而上调 Cx43表达，恢 复 G儿C的功能 。 [关键词]肾小球系膜细胞 ；黄芩苷 ；缝隙连接 ；蛋白激酶 c；缝隙连接蛋 白43 [中图分类号-]R285．5 [文献标志码]A EDOI]lO．3969／j．issn．1000—2219．2013．06．027 糖尿病肾病 (diabeticnephropathy，DN)是指糖 2 方 法 尿病时发生的肾小球、肾小管 、肾间质和 肾血管病 2．1 Western—blot法检测 高糖环境 下 GMC 中 变 。有临床及实验研究发现，黄芩苷可降低蛋 白 PKC和 Cx43表达 将 GMC按每孔 1O 的终密度 激酶C(proteinkinasec，PKC)在肾小管的表达，减 接种于 6孔细胞培养板中，低糖组加入 5 的达尔伯 轻 DN大 鼠肾小管细胞外基质 的沉积，具有 防治 克氏必需培养基 (Dullbecco’Sminimumessentialmedi— DN的作用 【J。黄芩苷是从清热解毒 中药黄芩 中 um，DMEM)，高糖组 ，黄芩苷高、中、低剂量组，PKC 提取的一种黄酮类化合物 ，具有抗菌、消炎和抗氧化 抑制剂组均加入浓度为25 的DMEM 培养液 ，并置 等药理作用。为进一步探讨黄芩苷防治DN的作用 于37℃、5 CO。培养箱中进行培养，待 6孔板中细 机制 ，笔者研究了黄芩苷对高糖环境下 肾小球系膜 胞生长融合约 5O 时，将所有的原液吸弃 ，重新加入 细胞 (glomerularmesangialcell，GMC)缝隙连接通 2m1含 1 胎牛血清 (fetalbovineserum，FBS)的低 讯功能 (gapjunctionintercellularcommunication， 糖完全培养液进行同步化，继续原条件培养 24h后， GJIC)、PKC及 缝 隙连 接 蛋 白 43(connexin43， 取浓度为 100、50、25 mol／I的黄芩苷溶液各 50 1 Cx43)的影 响，以期在蛋 白及分子水平探究黄芩苷 分别加入到黄