SmartCell溶酶体染色试剂盒Blue使用说明书.PDFVIP

SmartCell 溶酶体染色试剂盒*Blue*使用说明书 产品描述 溶酶体是细胞内具有单层膜囊状结构的细胞器 ，溶酶体被比喻为 细胞内的 “酶仓库”或 “消化系统”，溶酶体内含有许多种水解酶类 ， 能够将细胞吞噬进的食物或致病菌等大颗粒物质消化成生物大分子 ， 残渣通过外排作用排出细胞 ，分解很多种物质 ，也能在细胞分化过程 中 ，将陷入溶酶体内的某些衰老细胞器和生物大分子消化。溶酶体膜 内 pH值约 4.5-4.8 ，使得消化酶类可以在酸性条件下工作 ，溶酶体 + 外的胞质内 ，pH值为 7.2左右 ，溶酶体膜通过从胞质泵入 H 维持溶 酶体内外这种 pH差异。 Smart Cell溶酶体染色试剂盒*Blue*可以标记活细胞中的溶酶 体 ，使之带蓝色荧光(Ex/Em =433/480 nm)。本试剂盒使用染料为 一种疏水性复合物 ，属趋溶酶体染料 ，染料渗透进入完整的活细胞中 ， 有选择性进入溶酶体 ，并因溶酶体膜内外的不同 pH环境而被锁定在 溶酶体中。染料一旦进入溶酶体中 ，荧光显著性增强并非常稳定。基 于这一特点 ，本试剂盒可以用于酶标版、免疫组化和流式细胞技术等 应用 ，用于多种不同类型的研究中 ，包括细胞粘附性、趋化性、多药 物抗性、细胞活性、细胞凋亡和细胞毒性的研究 ，适用于增殖型和非 增殖型细胞 ，也可以用于悬浮和贴壁细胞。 Smart Cell溶酶体染色试剂盒是 Life-iLab公司专门研发的一类 荧光成像工具 ，试剂盒设计严谨 ，需人为手动操作的步骤很少。可用 来标记细胞器、亚细胞等结构 ，例如细胞膜、溶酶体、溶酶体和细胞 核等。Smart Cell溶酶体染色试剂盒提供了标记溶酶体的全套试剂 ， 针对每种细胞结构都能提供蓝色/绿色/红色/橙色等不同荧光供选 择 ，既可单独使用 ，也支持对细胞的多重荧光分析。这种高效的细胞 标签为从空间上和时间上研究发生的细胞活动提供了一种十分有效 的方法。 试剂盒组分 组分 数量 Component A 100 µL (500 X DMSO stock solution) LysoBrite Blue染料 Component B 活细胞染色 50 mL 缓冲液 使用方法 1. 准备溶酶体染色液 1.1室温避光放置5-10分钟 ，预热LysoBrite Blue染料(Component A)。 1.2 取 20µL预热好的 LysoBrite Blue染料(Component A) ，用 10 mL活细胞染色缓冲液(Component B)进行稀释。 注意：1)20μLLysoBriteBlue染料(ComponentA)足够完成1块96 孔板实验，剩余的LysoBriteBlue染料(ComponentA)可以根据需要 分装避光保存于-20℃，避免反复冻融。2)最佳染料浓度根据具体应 用会有不同，染色条件根据细胞类型、细胞或组织的染料渗透性不同 可以进行调整优化。 2. 细胞染色 2.1贴壁细胞 ：在 96孔板 （100μL ）或培养皿内培养细胞 ，当细胞 达到 70-80%融合度 ，在 96孔板或培养皿内添加等体积的染色工作 液(步骤 1.2) ，在 37°C, 5% CO 条件下培养细胞 30分钟-2小时。用 2 Dapi 滤光片在显微镜下进行荧光观察。 注意 ：如果细胞没有充分染色 ，可以适当增加染料浓度或增加染色时 间进行改善 2.2 悬浮细胞 在 1000 rpm条件下离心细胞培养液 5分钟 ，弃去上 清 ，用预热好的细胞培养液温和的重悬细胞 ，然后添加等体积的染色 工作液(步骤 1.2) ，在 37°C, 5% CO 条件下培养细胞 30分钟-2小时。 2 用 Dapi 滤光片在显微镜下进行荧光观察。 图1：U2OS 细胞用SmartCell溶酶体染色试剂盒*Blue*染色后进行成像分析 （所用96孔板为Cos