微生物遗传第五章细菌基因重组及遗传分析.pptVIP

① 大肠杆菌的供体或雄性细胞(如A菌株)记为F+，带有一个性因子或致育因子F (fertility factor)，而另一个不带性因子F的受体或雌性细胞(如B菌株)叫做F-； ② 杂交F+×F-是可育的，杂交F-×F-是不育的； ③ F因子可以传递，从F+到F-细菌，但必须通过细胞接触 ④ F因子能够自发丧失，一旦丧失就不能再恢复，除非从另一个F+细胞再把它传递过来。 分析结果： F因子是染色体外的一种遗传结构，也就是质粒(plasmid)。 F+是一种遗传性状 F 因子的存在使细菌成为F+ F 因子的丧失使细菌成为F- F+ 细菌分裂仍得到F+细胞 二、F质粒的结构及其在细胞中的存在状态 F质粒的遗传结构 F质粒的基因组由三个主要区段组成：转移区、复制区、插入区。 长度为33 kb，由23个基因组成，构成一个tra操纵子(tra operon)。 tra ABCEFGHKLQUVW与性菌毛的形成有关 tra YZMIGD等与F因子的转移有关 traG、traN 影响杂交对的配对形成与否 traI、traM 决定DNA转移起始 traI 编码解旋酶I(helicaseⅠ) traD 控制DNA转移； traY、traZ 编码的核酸内切酶能在转移起始区 oriT上切开一个缺口。 （1）转移区(transfer region) 复制区负责F质粒的自我复制 F质粒自主复制区为oriV（Vegetative origin of replication），在oriV中包含有复制起点。F质粒的复制是按θ型方式进行复制，它是一种严紧型质粒。 F质粒的拷贝数能被精确地控制，一个寄主细胞约有1~2个F质粒。rep（F replicative protein）编码一组与F质粒复制相关的蛋白质。 inc（incompatibility）基因产物使细胞具有不相容性。 （2）复制区（replication region） F质粒插入区包含4个插入顺序： 2个IS3 1个IS2 1个Tn1000（γδ） 它们与F质粒的整合、切除、易位有关 （3）插入区（insertion region） 2. F质粒在细胞内的存在形式 根据大肠杆菌细胞内有无F质粒及F质粒在细胞内的存在状态可将细胞分为4种类型：F-、F+、Hfr、F’。 F-：是细胞内不含F质粒； F+：是细胞内含有F质粒且独立染色体外； Hfr菌株(high frequency recombination strain)：高频重组菌株：是F质粒整合到宿主的染色体上，随着宿主染色体的复制而复制； F’是指携带了宿主的一部分染色体的F质粒。 三、F质粒与接合作用 1. F+×F-杂交 有F质粒的细胞在形态学上可以与F-明显区别。除了共有的大量表面菌毛以外，F+还有少量（通常在细胞对数生长期中只有1~3根）性菌毛。纤细的蛋白质性菌毛有的长数毫米，直径约为8nm。性菌毛在细菌的接合过程中起着十分重要的作用。 2. Hfr×F-杂交 Hfr菌株是怎样形成的呢? F质粒有两种方式整合到染色体上：同源重组、质粒和染色体共有插入序列和转座子。大肠杆菌染色体基因组有7个IS1、13个IS2及6个IS3；F质粒有1个IS2和2个IS3。 3. F’×F-杂交 F质粒在脱离Hfr细胞的染色体时也会发生差错，从而形成带有细菌染色体基因的F′质粒。而F′因子又可通过交换融合到细菌染色体的原来位置上，回复到原来的Hfr状态。 由于在F’×F-接合使用中能专一性地向F-转移F′质粒携带的供体基因，因而通过F′因子的转移而使受体菌改变其遗传性状，这种现象也被称为F 因子转导。 四、中断杂交试验和基因定位 中断杂交：就是将两个菌株（例如Hfr a+ strs×F- a strr）在培养液中进行通风培养，每隔一定时间取样，把菌液放入组织捣碎器里搅拌以中断杂交，经过稀释接种到鉴别培养基上，待形成菌落后鉴定它们的基因型。 1957年Wollman和Jacob首次进行中断杂交实验： 供体菌：HfrH strs thr+ leu+ azis tons lac+ gal+ 受体菌： F- strr thr? leu- azir tonr lac- gal- 将大约10倍的F-菌与 Hfr对数期菌混合，轻轻振荡培养 在不同时间间隔取样，然后在组织搅拌中剧烈振荡 振荡后的培养物涂布于加了链霉素的基本培养基上 筛选不同于两个亲本的thr+ leu+ strr重组子 再对每一个重组子的非选择性标记azi ton lac gal 进行测定。 五、BAC人工染色体 为什么会想到把F质粒改